High Pressure Liquid Chromatography에 의한 尿中 Neopterin의 定量 = Rapid Determination of Neopterin in Human Urine by High Pressure Liquid Chromatography
뇨중 neopterin의 소장은 체내 세포성 면역의 전반적 상태를 반영해주며 neopterin의 증가는 T-cell/macrophage axis의 활성화를 나타낸다고 하며 각종 면역질환의 연구에 많은 도움을 줌에 따라 neopterin정량 방법의 개선은 의의가 클 것으로 사료되어 본 연구는 HPLC를 이용하여 시료의 전처리 과정없이 뇨중 neopterin을 분석하는 방법을 고안하고 그 평가와 함께 방법을 기술하였다. 본 연구에서 neopterin을 분석하기 위해 column은 Radial pak C18을 사용하였며 이동상은 15mmol/L potasium phosphate buffer(pH 7.0)를 사용하였으며 분리된 neopterin은 excitation 파장 353㎚, emission 파장 438㎚에서 형광을 측정하였으며 creatinine은 자외선 235㎚에서 그 흡광도를 측정하였다.
본 방법은 검사신뢰도가 우수하였으며 시료의 전처리과정도 제거하여 짧은 시간내에 neopterin을 측정할 수 있었다. 따라서 본 방법은 임상 검사실에서도 뇨중 neopterin을 측정할 목적으로 쉽게 적용할 수 있을 것으로 생각된다.
Neopterin is a pyrazinopyrimidine compound derived from GTP. It represents an intermediate product in the synthetic pathway of biopterin. Biopterin itself is known to serve as an essential cofactor in neurotransmitter synthesis.
Moreover, neopterin may be an in-vitro indicator of activation of the immune system. Its raised excretion has been related to the action of interferons on the T-lymphocyte/macrophage axis. Increased urinary neopterin levels has been observed in patients with malignant disease, viral infections, autoimmune diseases, acquired immuno-deficiency syndrome(AIDS), and allograft rejections.
Hence, a rapid, simplified high pressure liquid chromatographic method was described for simultaneously measuring urinary neopterin and creatnine, using a reversed phase column and a strongly polar phosphate buffer (pH 7.0) for elution. Eluted neopterin was moniotred by fluorescence at an excitation wavelength of 353 ㎚ and measured at 438 ㎚. The absorbance of the creatinine was measured at 235 ㎚. Unlike previous methods, this method involves neither tedious cleanup procedures nor special equipment. This analysis requires only 15 minutes and allows very good reproducibility of retention times. This method is well-suited for automation and routine clinical laboratory in order to quantify urinary neopterin.
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