소 설사성 바이러스 3´nontranslating region과 C형 간염바이러스3´nontranslating region의 비교 = Comparison of bovine viral diarrhea virus 3´NTR with hepatitis C virus 3´NTR
저자
이영민 (충북대학교 의과대학 미생물학교실, 의학연구소)
발행기관
학술지명
권호사항
발행연도
2000
작성언어
Korean
주제어
KDC
510.000
자료형태
학술저널
수록면
83-90(8쪽)
제공처
소장기관
연구목적: C형 간염바이러스(hepatitis C virus, HCV)는 B형 간염바이러스(hepatitis B virus)와 함께 급성 및 만성 간염과 간경화에 이어 간암의 주원인중의 하나로 최근에 밝혀진 이후 조직 배양의 결핍으로 효과적인 항바이러스성 치료제의 개발에 큰 진전을 보지 못 하고 있다. 이 연구는 HCV 게놈 상에 존재하는 두 cia-acting elements 중에서 3'NTR (3'nontranslated region)의 기능을 소설사성 바이러스 (Bovine viral diarrhea virus, BVDV)를 이용한 chimeric virus들을 만들어 BVDV 3'NTR과 HCV 3'NTR를 비교하는데 중점을 두었다.
연구재료 및 방법: 먼저 감염성있는 HCV cDNA 와 감염성있는 BVDV cDNA를 이용하여 각각의 5'NTR과 3'NTR를 서로 다른 open reading frame을 이용하여 chimeric cDNA clone들을 만들었다. 이들 chimeric cDNA로부터 T7 중합효소를 이용하여 in vitro 전사를 통해 합성된 다량의 바이러스 RNA를 electroporation을 통해 MDBK 세포에 주입시킴으로써 재조합된 chimeric virus들의 감염성을 알아보았다. 이와 더불어, selective marker를 이용 바이러스 복제 유무와 이로 인한 병변 효과의 정도를 알아보았다.
결과: HCV의 open reading frame을 이용하여 BVDV의 5'NTR과 3'NTR를 가진 chimeric viral RNA들은 감염성이 전혀 없어서, BVDV 5'NTR과 3'NTR은 HCV의 cis-acting element를 대신하지 못함을 알 수 있었다. 이와 마찬가지로, BVDV의 open reading frame을 이용할 경우 HCV의 5'NTR과 3'NTR도 역시 BVDV의 5'NTR과 3'NTR를 대신할 수 없기 때문에 chimeric viral RNA의 바이러스 복제나, 이로 인한 병변 효과를 전혀 관찰할 수 없었다.
결론: 두 바이러스의 cis-acting element중에서 5'NTR과는 달리, BVDV 3'NTR는 기능적인 측면에서 HCV 3'NTR를 대신할 수 없음을 알 수 있었다. 이것은 아마도 3'NTR의 경우 바이러스의 (-) 가닥 합성 시작에 결정적으로 작용할 뿐 아니라, 다양한 세포 단백질과의 상호 작용 또는 자기 자신의 바이러스 단백질과의 상호 작용이 각각의 바이러스 복제에 결정적으로 작용하기 때문인 것으로 간주된다.
Purpose: Hepatitis C virus (HCV) is the recently identified major etiologic agent of non-A, non-B hepatitis and has implicated to be associated with hepatocellular carcinoma. In spite of recent biochemical studies, function of HCV 3'NTR on viral replication has not been understood due to a lack of efficient tissue culture system. This study is to understand the function of HCV 3'NTR on viral replication using bovine viral diarrhea virus as a surrogate system.
Materials and Methods : Various full-length chimeric HCV/BVDV or BVDV/HCV viral RNAs were systhesized from their chimeric CDNA plasmid using T7 polymerase. The infectivity of these chimeric viral RNAs were examined by electroporating into MDBK cells. The viral replication of these chimeric viral RNAs were monitored by cytopathic effect and viral protein production.
Results: Chimeric HCV viral RNAs containing BVDV 5'NTR and 3'NTR were not infectious. Likewise, chimeric BVDV viral RNAs with HCV 5'NTR and 3'NTR (BVDV/HCV) were also not infectious. The transfected MDBK cells with BVDV/HCV chimeric viral RNA containing the pac gene were not survived under puromycin selection.
Conclusions : Unlike HCV 5'NTR, we found that BVDV 3'NTR could not be replaced by HCV 3'NTR in the background of BVDV. Therefore, 3'NTR, one of viral cis-acting elements, was only functional in the context of its own viral genome. This study suggests that either cellular protein(S) or viral protein(S) interacting with BVDV 3'NTR or HCV 3'NTR are specific to its own virus.
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