Development of Hepatitis Vaccine in Genetically Engineered Mammalian Cell = 동물세포를 이용한 B형 간염바이러스 백신개발
저자
Himadri, Samanta (Eugene Tech International Inc.) ; Choi, Kyung-Hee (Department of Biology, Chung-Ang University)
발행기관
中央大學校 遺傳工學硏究所(Institute of Genetic Engineering Chung-Ang University)
학술지명
권호사항
발행연도
1988
작성언어
English
KDC
476.1
자료형태
학술저널
수록면
71-78(8쪽)
제공처
소장기관
B형 간염 바이러스 표면항원 유전자가 포유동물세포에서 발현되도록 bovine papilloma virus(BPV)를 vector로 사용하여 몇가지 재조합 플라스미드를 제조하였다. promoter는 mouse metallotheionin promoter를 사용하였고, BPV의 크기를 변화시켰으며 또한 HBsAg 유전자의 polyadenylation signal을 제거하기도 하였다. 포유동물에서 세가지의 재조합 플라스미드는 모두 HBsAg을 발현시켰으며, BPV유전자와 HBV유전자가 완전히 들어있는 vector에 의해 가장 많은 HBsAg이 생산되었다. HBV DNA는 episomal 상태로 남아있는것이 아니고, 마우스세포의 염색체에 삽입되어 있는것이 확인되었으며, HBV DNA의 copy 수와 HBsAg의 생산량과는 비례하지 않는 것이 밝혀졌다. HBsAg 생산세포는 2-3개월동안 계대배양의 필요없이 계속해서 HBsAg을 배양액에 분비하였다. 이를 정제하여 E.M.으로 관찰한 결과 particle을 형성함이 확인되었고, western blot 분석을 통해 pre-s를 포함하고 있음을 밝혔다.
We have expressed the surface antigen of hepatitis B virus (HBV) in mouse fibroblast cell line using metallothionein-bovine papilloma virus vectors. We have used three different recombinant plasmids and find that the expression level varies significantly from one plasmid to the other. One of the constructs gave very high express level and has been characterized further. We have failed to detect any plasmid in the episomal form in the producing clones and all the HBV DNA found to be integrated in the mouse chromosome at more than one site. We do not find any linear relationship between the number of copies HBV DNA and the level of the surface antigen produced. Cells can continuously be grown in the presence of cadmium chloride without splitting for more than two months and the secreted surface antigen be harvested during this period. The antigen is secreted as particle as have been found in electron micrograph of purified antigen. From western blot studies we find that the antigen contains the pre-s region.
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