Hybridoma Cell Lines Producing Monoclonal Antibodies against Free-living Amoeba: Acanthamoeba royreba = 自由生活 아메바, Acanthamoeba royrebo에 대한 Monoclonal 抗體 분비하는 Hybridoma
저자
Im, Kyung-Il (Institute of Tropical Medicine, Yonsei University) ; Lee, Keun-Tae (Institute of Tropical Medicine, Yonsei University) ; Soh, Chin-Thack (Institute of Tropical Medicine, Yonsei University) ; Kidson, Chev (Queensland Institute of Medicine Research)
발행기관
학술지명
권호사항
발행연도
1982
작성언어
English
KDC
518.000
자료형태
학술저널
수록면
17-22(6쪽)
제공처
소장기관
自由生活아메바로 免疫된 마우스의 spleen lymphocyte와 마우스 myeloma cell을 fusion시켜 生成된 hybridoma에 의해 분비되는 monoclonal 항체의 特異性을 硏究하였다.
사용된 自由生活아메바로는 非病原性인 Acanthamoeba royreba와 病原性인 Acanthamoeba culbertsoni였으며 실험동물로는 BALB/C마우스였다. CGV배지에서 무균배양된 아메바 10?을 마우스 복강내로, 2週간격으로 세번 注入하여 免疫시켰다. hybridoma제조는 Kohler등(1976) 및 Galfre등(1977)의 방법에 의하였고, 이에 의해 생성되는 抗體의 特異性을 檢定하기 위하여 간접형광항체법을 使用하였다.
Acanthamoeba royreba로 면역시킨 마우스로 부터 hybridoma 네개를 얻을 수 있었으며 이들 배양액중의 monoclonal항체價를 間接형광한체법을 利用하여 측정하였다. 同種항원을 사용했을 때 그 항체가는 1:16∼1:64였으며, 異種항원 A. culbertsoni, A. lenticulata, A. hatchotti, A triangularis, Acanthamoeba sp.인 YM-2, YM-3, YM-4 및 Naegleria fowleri를 사용했을 때는 抗體價는 1:2∼1:4였다. 抗 A. royreba血淸의 항체가는 同種항원 사용 때 1:4096, 異種항원사용시 1:256∼1:512였으며 N. fowleri항원 使用때는 1:8이었다.
自由生活아메바 영양형의 抗原性을 연구하기 위하여 배양된 영양형의 세포막을 ultrasonicator로 파괴시키고 differential sucrose density gradient centrifugation으로 세포막을 분리하여 SDS polyacrylamide gel electrophoresis하여 蛋白成分을 관찰하였다.
A. royreba와 A. culbertsoni의 세포막으로 부터 protein band는 각각 23개, 17개였다. 공통적인 band는 5개로 소수였고 대부분 다른 종류였음을 알 수 있었다.
Immunization of BALB/C mice with Acanthamoeba royreba was carried out three times intraperitoneally with 10? trophozoites at 2 weekly intervals. The isolation of spleen cells from immunized mice for cell fusion was done three days after the last immunization. Immune spleen cells were fused by polyethylene with NS-1 myeloma cells as decribed by Galfre et al.(1977) and Kohler et al.(1976).
To assay medium supernates from four cloned hybridomas, indirect immunofluorescence was performed using free-living amoeba trophozoites. Supernates of four hybrid cultures from anti-A. royreba hybridoma had titre between 1:16 and 1:64, but fluorescent antibody titres were 1:2 or 1:4 when tested using other free-living amoeba antigens. Anti-A. royeba mouse serum had a titre of 1:4096, and 1:256-1:512 when tested with other species of Acanthamoeba, and 1:8 with Naegleria fowleri antigen.
The cell membrane of A. royreba contained 23 protein bands by SDS polyacrylamide gel electrophoresis, but 17 in A. culbertsoni. Only 5 of them were recognized as common band.
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