한우 체외수정란의 동결보존 및 핵이식에 관한 연구 : Ⅱ. 체외수저란의 동결방법이 동결.융해후 생존율에 미치는 영향 Ⅱ. Effects of Survival Rates of Frozen-Thawed Embryo Frozen Methods = Studies on Cryopreservation and Nuclear Transplantation of in Vitro Fertilized Bovine Embryos
본 연구는 수정란의 동결기법을 확립하고자 배반포기에 있는 한우 체외수정란을 이용하여 유리화 및 직접이식 동결방법으로 동결을 실시하여 동결·융해후 생존성, 동해방지제의 종류, 평형 및 할구의 손상여부 등에 대한 영향을 조사한 결과는 다음과 같다.
유리화 동결방법중 GESD-VS와 EFS 용액을 동해방지제로 사용하였을 때 동결·융해 수정란의 생존율은 각각 69.8 및 37.3%로써 이들간에 유의적(P<0.05)인 차이가 있었으며, 동결기를 이용한 직접이식 동결법은 생존율이 56.0%로써 유리화 동결방법과는 유의적(P<0.05)인 차이가 없었다. 동결·융해후 생존한 수정란의 발달율은 GESD-VS용액을 사용하였을때가 53.4%로써 EFS용액을 사용하였을때의 24.0%보다는 유의적(P<0.05)으로 높게 나타났다.
1 및 2단계 평형시 단계별 생존율은 각각 11.7 및 23%로써 이들간에 유의적(P<0.05)인 차이가 없었으며, 동결·융해 수정란의 발달율도 각각 10 및 16.8%로써 평형방법간에 유의적(P<0.05)인 차이가 없었다.
신선수정란, 유리화 동결수정란 및 동결비를 이용한 직접이식 동결법으로 동결하였을 때 동결·융해 수정란의 할구수는 각각 98.7±2.3개, 69.1±2.6 및 84.2±2.7개로써 동결방법들간에 유의적(P<0.05)으로 할구수의 차이가 많았다.
This study was carried out to investigate the effect of cryoprotectants, equilibration step, number of blastomeres on survival and developmental rates of bovine in vitro fertilized blastocysts(Korean native cattle) frozen/thawed by vitrification and frozen for direct transfer(1.8M ethylene glycol).
The bovine oocytes were collected from 2-5mm follicles, matured for 24hrs in 5% CO_2 incubator and then fertilized with cauda epididymis sperm. Blastocyst at day 7-9 ater IVF were frozen in vitrification and frozen for direct transfer(1.8M ethylene glycol). Survival and developmental rates of frozen-thawed IVF embryos were examined. The results were as follow ; The survival rate of IVF blastocyst after vitrification in GESD-VS, EFS and 1.8M ethylene glycol solution were 69.8, 37.3 and 56.0%, respectively(P<0.05). When equilibrated in 1 step(11.7%) was similar to the result from 2 step(23.0%), and no significantly(P<0.05) different between the equilibrated steps. The number of blastomere at blastomere at blastocyst of bovine embryos frozen/thawed in fresh, vitrification and freezing for direct transfer were 98.7±2.3, 69.1±2.6 and 84.2±2.7, respectively, and were significantly(P<0.05) different between the freezing methods.
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