돼지 미성숙 난포란의 회수 및 체외수정에 관한 연구 = Studies on Follicular Oocyte Collection and In Vitro Fertilization of Porcine
본 연구는 돼지의 체외수정에 있어서 난포란의 회수방법과 체외수정란 및 체외발달율을 조사하여 체외수정의 기본 원리를 밝히고자 본 연구를 수행하였다. 도축장으로부터 채집한 난소의 난포에서 흡입법, 세절법 및 흡입후세절법 등으로 난포란을 채취하여 등급별로 분류하여 회수율을 조사하였으며, 채취한 난포란은 액상정액과 정소상체미부 정액을 사용하여 체외수정을 시킨후 TCM-199 와 NCSU-23 배양액으로 체외배양을 실시하였다.
본 연구에서 얻은 결과를 요약하면 다음과 같다. 회수방법당 각각 37개의 난소에서 회수한 난포란의 수는 흡입법이 1,365개, 세절법이 1,884개 및 흡입후 세절법이 3.830개로써 난소당 난포란의 수는 각각 36.9, 50.9 및 103.5개로써 회수방법간에 유의적(P<0.05)인 차이가 있었다. 액상정액과 정소상체미부 정액을 사용하였을 때 수정율은 각각 83.0 및 83.% 로써 정액간에 유의적(P<0.05) 인 차이는 없었다. 체외수정이 이루어진 난자들의 분할율도 액상정액(60.8%) 과 정소상체미부 정액(69.0%) 간에 유의적(P<0.05) 인 차이는 없었다. 2-4세포기로의 발달율은 24.6 및 28.4%로써 배양액간에 위의적(P<0.05)인 차이는 없었으며, 상실배로의 발달율도 TCM-199 와 NCSU-23 배양액이 각각 14.8 및 24.5% 로써 이들간에 유의적(P<0.05)인 차이는 없었다.
To improve the efficiency of in vitro production of embryos with follicular oocytes in pig, the recovery rates, in vitro fertilization and development, and the time required for collectng and processing oocytes by aspiration with or without slicing were evaluated comparatively. The oocytes were collected by aspiration of follicles(2-6mm) with or without slicing ovaries after aspiration, and classified into grade I-IV oocytes by the morpholoy of cumulus cells attached and the homogeneity of cytoplasmic granules. The grade Ⅰ-Ⅱ oocytes were matured invitro for 46 hours in TCM-199 and NCSU-23 supplemented with 1㎍/㎖ FSH, 2IU/㎖ hCG, 1㎍/㎖ estradiol-17 at 39℃ under 5% CO_2 in air. They were fertilized in vitro by epididymis sperm and ejaculated sperm treated with hypotaurin for 24 hours. and then the zygotes were co-cultured in vitro with pFF(porcine follicular fluid) for 7-9 days. The results obtained were as follows:
The number of ocytes recovered per ovary was averaged 30.7 by aspiration, 50.8 by slicing and 103.5 by aspiration post slicing. The number of grade Ⅰ oocytes recovered was total 0.2% by aspiration, 0.1% by slicing and 0.1% by aspiration post slicing. The oocytes recovered per ovary was significantly(P<0.05) higher as recovery methods. The cleavage rates of the embryos obtained from 83.0(ejaculate sperm) and 83.1(epididymis sperm) respectively(P<0.05). In vitro developmental rates(9.9 and 18.6%) of embryos cultured in TCM-199 and NCSU-23 up to morula stage were non significantly(P<0.05) different between the culture media.
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