Enhanced intracellular survival of Brucella abortus in RAW 264.7 cells by mutagenesis at BruAb2_1031 = Enhanced intracellular survival of Brucella abortus in RAW 264.7 cells by mutagenesis at BruAb2_1031
저자
( Myunghwan Jung ) ; ( Soo Jin Shim ) ; ( Young Bin Im ) ; ( Woo Bin Park ) ; ( Hansang Yoo )
발행기관
학술지명
권호사항
발행연도
2016
작성언어
Korean
자료형태
학술저널
수록면
255-255(1쪽)
제공처
Introduction: Brucella abortus(B. abortus) , known as intracellular bacteria, can invade and replicate in professional and nonprofessional phagocytic cells. Pathogenesis of B. abortus is more related to strategies for intracellular survival such as modulation of normal host functions than production of classical virulence factors such as exotoxin, cytolysins, capsules, fimbria, plasmids, lysogenic phage, and endotoxic lipopolysaccharide (LPS) molecules. Therefore, identification of the intracellular survival strategies of B. abortus is important in a study on pathogenicity of brucellosis. As the first step to find out the intracellular survival strategies, functions of Brucella genes were analyzed using transposon mutagenesis based on differences in the transcriptional responses between macrophages infected with the B. abortus mutant strains and the B. abortus wild strain.
Materials and methods: Mutant strains derived from B. abortus 1119-3 strain, C3, C24, and C30, were generated by Tn5 transposome complexes.Identification of transposon insertion site was conducted using randomly primed PCR and Southern blot. Macrophages were infected with B. abortus wild and mutant strains of MOI 10. Total RNA was extracted from the cells at 0, 12, 24 h after infection using RNeasy mini kit as described by the manufacturers. Following purity and integrity check, RNA samples were subjected to microarray hybridization. The results of microarray were validated using quantitative real-time PCR. The genes showing change of expression level were analyzed based on the pathway, gene networks, and biological process. Gentamicin assay was also carried out using RAW 264.7 cells infected with each strain at MOI 100 to demonstrate levels of internalization, intracellular survival, and replication in RAW 264.7 cells.
Results: The single insertion of transposon was confirmed by randomly primed PCR and Southern blot in the mutant strains. Following infection, wild strain infected RAW 264.7 cells showed up-regulated inflammatory responses and down-regulated phagolysosome formation process. The genes involved in apoptosis showed both up- and down-regulation. When compared to the transcriptional responses of wild strain infected cells, down-regulation of genes associated with cytokine responses and apoptosis was observed in RAW 264.7 cells infected with C3 mutant strain, in which mutation was confirmed at the site of the ATP-binding cassette transporter permease (BruAb2_1031). However, RAW 264.7 cells infected with C24 and C30 mutant strains did not show notable differences when compared to the wild strain infected cells. Although B. abortus wild strain showed high level of internalization, a steep decrease in CFU number of intracellular brucellae was observed in wild strain infected RAW 264.7 cells when compared to C3 mutant (p< 0.01). In real-time PCR to verify the microarray results, all genes determined by PCR showed the same direction in expression levels as the microarray results.
Conclusion: C3 mutant strain infected RAW 264.7 cells showed down-regulation in genes associated with protective immune responses to Brucella infection. This result suggested that C3 mutant strain has more enhanced strategies for intracellular survival than the wild strain. Therefore, it is plausible that transposon insertion at BruAb2_1031 of Brucella abortus could enhance the intracellular survival in RAW 264.7 cells.
Acknowledgements: This work was supported by NRF grant funded by MSIP (No. 2014R1A2A2A01007291), Bk21 PLUS and Research Institute for Veterinary Science, Seoul National University, Seoul, Republic of Korea.
서지정보 내보내기(Export)
닫기소장기관 정보
닫기권호소장정보
닫기오류접수
닫기오류 접수 확인
닫기음성서비스 신청
닫기음성서비스 신청 확인
닫기이용약관
닫기학술연구정보서비스 이용약관 (2017년 1월 1일 ~ 현재 적용)
학술연구정보서비스(이하 RISS)는 정보주체의 자유와 권리 보호를 위해 「개인정보 보호법」 및 관계 법령이 정한 바를 준수하여, 적법하게 개인정보를 처리하고 안전하게 관리하고 있습니다. 이에 「개인정보 보호법」 제30조에 따라 정보주체에게 개인정보 처리에 관한 절차 및 기준을 안내하고, 이와 관련한 고충을 신속하고 원활하게 처리할 수 있도록 하기 위하여 다음과 같이 개인정보 처리방침을 수립·공개합니다.
주요 개인정보 처리 표시(라벨링)
목 차
3년
또는 회원탈퇴시까지5년
(「전자상거래 등에서의 소비자보호에 관한3년
(「전자상거래 등에서의 소비자보호에 관한2년
이상(개인정보보호위원회 : 개인정보의 안전성 확보조치 기준)개인정보파일의 명칭 | 운영근거 / 처리목적 | 개인정보파일에 기록되는 개인정보의 항목 | 보유기간 | |
---|---|---|---|---|
학술연구정보서비스 이용자 가입정보 파일 | 한국교육학술정보원법 | 필수 | ID, 비밀번호, 성명, 생년월일, 신분(직업구분), 이메일, 소속분야, 웹진메일 수신동의 여부 | 3년 또는 탈퇴시 |
선택 | 소속기관명, 소속도서관명, 학과/부서명, 학번/직원번호, 휴대전화, 주소 |
구분 | 담당자 | 연락처 |
---|---|---|
KERIS 개인정보 보호책임자 | 정보보호본부 김태우 | - 이메일 : lsy@keris.or.kr - 전화번호 : 053-714-0439 - 팩스번호 : 053-714-0195 |
KERIS 개인정보 보호담당자 | 개인정보보호부 이상엽 | |
RISS 개인정보 보호책임자 | 대학학술본부 장금연 | - 이메일 : giltizen@keris.or.kr - 전화번호 : 053-714-0149 - 팩스번호 : 053-714-0194 |
RISS 개인정보 보호담당자 | 학술진흥부 길원진 |
자동로그아웃 안내
닫기인증오류 안내
닫기귀하께서는 휴면계정 전환 후 1년동안 회원정보 수집 및 이용에 대한
재동의를 하지 않으신 관계로 개인정보가 삭제되었습니다.
(참조 : RISS 이용약관 및 개인정보처리방침)
신규회원으로 가입하여 이용 부탁 드리며, 추가 문의는 고객센터로 연락 바랍니다.
- 기존 아이디 재사용 불가
휴면계정 안내
RISS는 [표준개인정보 보호지침]에 따라 2년을 주기로 개인정보 수집·이용에 관하여 (재)동의를 받고 있으며, (재)동의를 하지 않을 경우, 휴면계정으로 전환됩니다.
(※ 휴면계정은 원문이용 및 복사/대출 서비스를 이용할 수 없습니다.)
휴면계정으로 전환된 후 1년간 회원정보 수집·이용에 대한 재동의를 하지 않을 경우, RISS에서 자동탈퇴 및 개인정보가 삭제처리 됩니다.
고객센터 1599-3122
ARS번호+1번(회원가입 및 정보수정)