Corynebacterium glutamicum hisD유전자의 염기서열 결정과 유사성 분석 = Molecular Cloning of the hisD Gene from Corynebacterium glutamicum
저자
발행기관
숙명여자대학교 자연과학연구소(The Research Institute of Natural Sciences Sookmyung Women's University )
학술지명
자연과학논문집(Journal of Natural Sciences Sookmyung Women's University)
권호사항
발행연도
2002
작성언어
Korean
주제어
KDC
400.000
자료형태
학술저널
수록면
71-76(6쪽)
제공처
소장기관
Corynebacterium glutamicum의 DNA library를 이용하여 Escherichia coli histidine 영양요구 균주에 complementation하는 방법으로 hisD유전자를 클로닝하였다. E. coli argD mutant에 complementation하는 6.8 kb와 4.0 kb fragment를 포함하는 recombinant DNA를 pHD1와 pHD2로 명명하고 여러 가지 제한효소들로 제한효소지도를 작성하였다. pHD1와 pHD2의 overlap되는 4.0 kb fragment부위가 bifunctional enzyme인 histidinol dehydrogenase를 암호화하는 hisD 유전자를 포함함을 알 수 있었으며, 제한효소지도를 이용하여DNA 조각을 subcloning하고 형질 전환하여 hisD 유전자의 최소단위는 BamHI-KpnI 1.5 kb를 포함하는 pHD23임을 확인하였다. 염기서열 결정결과 pHD23은 1,299 bp의 ORF를 가지며 432개의 아미노산으로 구성된 분자량 46 kDa의 polypeptide를 암호화암을 알 수 있었다. 또한 이 유전자는 Gram-positive bacteria의 Mycobacterium tuberculosis의 hisD유전자와 61%로 높은 유사성을 보인다.
더보기Complementation cloning of the hisD gene in Corynebacterium glutamicum was done by transforming the genomic DNA library into the corresponding histidine auxotrophs of Escherichia coli. Recombinant plasmids containing 6.8 kb and 4.0 kb fragments were also able to complement the E. coli hisD mutant. The insert DNA fragments in the recombinant plasmids, named pHD1 and pHD2, were physically mapped with several restriction enzymes. By further subcloning the entire DNA fragment by their complementation analysis, we identified the hisD gene of C. glutamicum on the 1.5 kb BamHI-KpnI pHD23 fragment. The length corresponding to the ORF of hisD was 1,299 bp and it contained 432 amino acid with a molecular weight of 46 kDa.
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