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Smad에 의한 alkaline phosphatase 유전자의 발현 조절기전 = The effect of BMP regulated Smad protein on alkaline phosphatase gene expression
저자
김난진 (경북대학교 치과대학 소아치과학교실) ; 류현모 (경북대학교 치과대학 구강생화학교실) ; 김현정 (경북대학교 치과대학 소아치과학교실) ; 김영진 (경북대학교 치과대학 소아치과학교실) ; 남순현 (경북대학교 치과대학 소아치과학교실)
발행기관
학술지명
大韓小兒齒科學會誌(JOURNAL OF THE KOREAN ACADEMY OF PEDIATRIC DENTISTRY )
권호사항
발행연도
2001
작성언어
Korean
주제어
KDC
515.000
등재정보
KCI등재후보
자료형태
학술저널
발행기관 URL
수록면
238-246(9쪽)
KCI 피인용횟수
0
제공처
본 실험은 탁월한 골유도능으로 관심의 대상이 되고 있는 RMP의 세포내 신호 전달자로 알려진 Smad 1과 Smad 5가 조 골세포 초기 분화표지인자인 ALP 유전자의 발현에 미치는 영향 및 그 조절기전을 알아보고자 하였다. BMP 처리 없이도 Smad에 의해 ALP가 발현되는가를 알아보기 위해 Smad 1과 Smad 5가 각각 stably transfection된 C2C12 세포를 3일간 배양후 histochemical assay를 하였고, Smad 1과 Smad 5의 expression vector와 ALP promoter vector를 transient co-transfectiongksgn ALP promoter activity를 측정하였다. Smad에 의한 BMP의 효과를 알아보기 위해서 100ng/ml의 BMP-2를 처리한 군과 처리하지 않은 군으로 나누어 세포를 배양한후 ALP 유전자의 발현을 northern blot analysis로 확인하였다. Smad가 ALP 유전자의 발현을 직접적으로 조절하는가를 알아보기 위여서는 단백질 합성억제제인 cycloheximide를 전처리하여 ALP 유전자의 발현을 northern blot analysis하였다.
이상의 실험결과 다음과 같은 결론을 얻었다.
·Smad 1과 Smad 5가 과발현된 세포에서는 BMP 처리없이도 ALP가 발현된다.
·Smad 1과 Smad 5가 과발현된 세포에서 RMP 처리후 ALP 발현 증가율이 대조군 보다 현저히 높게 나타나 Smad가 BMP 효과를 증가시킨다는 것을 알수있다.
·Smad는 새로운 단백질의 합성을 통해 ALP 유전자를 발현시킨다.
Bone morphogenetic proteins(BMPs), members of the transforming growth factor β(TGF-β) superfamily were first identified as the factors that induce ectopic bone formation in vivo, when implanted into muscular tissue. Especially BMP-2 inhibits terminal differentiation of C2C12 myoblasts and converts them into osteoblast lineage cells. In the molecular mechanism of the signal transduction of TGF-β and related factors, intracellular signaling proteins were identified as Smad. In previous study, it has been reported that Smad 1 and Smad 5, which belong to the R-Smad family mediate BMP signaling, were involved in the induction of osteoblast differentiation in C2C12 cells.
To understnad the role of Smads involved in osteogenic transdifferentiation in C2C12 cell, in present study, after we stably transfected C2C12 cells with each.
Smad(Smad 1, Smad 5) expression vector, cultured for 3 days and stained for alkaline phophatase activity. ALP activity positive cells appeared in the Smad 1, Smad 5 stably transfected cell even in the abscence of BMP.
After transiently co-transfected C2C12 cells with each Smad expression vector and ALP promoter, it was excence of MBP. These result suggested that both Smad 1 and Smad 5 were involved in the intracellular BMP signals which induce osteoblast differentiation in C2C12 cells.
The effect of BMP on C2C12 cells with Smad 1, Smad 5 transfected were studied by using northern blot analysis. the treatment of BMP upregulated ALP mRNA level in three groups, especially upregulation of ALP was larger in Smad 1, Smad 5 transfected cell than control group.
Pretreatment with cycloheximide(10㎍/ml), a protein synthesis inhibitor resulted in blocking the ALP gene expression even in BMP(100ng/ml) treated cell. These results suggested that Smad increased the level of ALP mRNA via the synthesis of a certain transcriptional regulatory protein.
분석정보
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2002-01-01 | 평가 | 등재후보 1차 PASS (등재후보1차) | KCI후보 |
2001-01-01 | 평가 | 등재후보학술지 선정 (신규평가) | KCI후보 |
기준연도 | WOS-KCI 통합IF(2년) | KCIF(2년) | KCIF(3년) |
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2016 | 0.39 | 0.39 | 0.37 |
KCIF(4년) | KCIF(5년) | 중심성지수(3년) | 즉시성지수 |
0.36 | 0.35 | 0.399 | 0.05 |
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