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출아효모에서 연속적 δ-sequence 삽입유도에 의한 β-1,3-glucanase 활성 증가
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2014
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Korean
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1046-1054(9쪽)
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β-1,3-glucanase는 다양한 바이오공정에 널리 사용되어지는 효소로서 산업적 이용가치 증대를 위해 β-1,3-glucanase의 대량생산이 요구되어 지고 있다. 본 연구에서는 반복서열 δ-sequence에 의한 integration를 통해 Aspergillus oryzae유래의 β-1,3-glucanase (EXGA)의 과발현 유도를 연구하였다. 먼저 효모내의 여러 염색체상에 EXGA 유전자를 integration하기 위해 pRSδ-exgA와 pRSδK-exgA 플라스미드를 구축하였다. 이 플라스미드는 유전자의 구성적 발현을 위한 ADH1 프로모터, 분비생산을 위한 signal sequence와 β-1,3-glucanase유전자의 integration을 위한 δ-sequence를 포함하고 있다. 먼저 pRSδ-exgA 플라스미드를 BY4742△exg1 균주에 형질전환하고, 재조합 β-1.3-glucanase가 안정하게 과발현 및 분비생산됨을 확인하였다. 다음으로 geneticin 선별을 통한 integration유도와 β-1,3-glucanase 활성과의 관계를 조사해보기 위해 pRSδK-exgA 플라스미드를 BY4742△exg1(YKY082) 균주에 도입한 결과, geneticin 농도 증가에 따라 β-1,3-glucanase 활성도 증가되었고, geneticin 농도 0.8 ㎎/ml가 β-1,3-glucanase과발현에 적합한 농도임을 확인 할 수 있었다. 이어서 pRSδK-exgA 플라스미드는 연속적 δ-integration에 의해 효모세포 내에 도입되어, 한번, 두번, 세번 그리고 네번의 integration에 의해 β-1,3-glucanase의 비활성은 0.063, 0.095, 0.131 그리고 0.165 unit/ml/OD600로 증가되었다. 또한 연속적 integration에 의해 β-1,3-glucanase의 활성이 증가됨에 따라 다양한 염색체에 도입된 EXGA 유전자의 복제수(integration 빈도)도 같이 증가되었음을 확인하였다. 따라서 본 연구 결과는 반복적 δ-sequence integration방법을 통해 재조합 β-1,3-glucanase의 활성을 점진적으로 안정하게 증가시킬 수 있음을 제시하였다.
더보기Beta-1,3-glucanase is widely used in various biotechnological and industrial processes, with overproduction required to enable versatile utilization. We examined the overexpression of β-1,3-glucanase (EXGA) from Aspergillus oryzae using δ-sequence-mediated integration. We constructed pRSδ-exgA and pRSδK-exgA plasmids for integration of the EXGA gene into various chromosomes of Saccharomyces cerevisiae. These plasmids contain the ADH1 promoter for constitutive expression, a signal sequence (exoinulinase signal sequence [INU1 s.s]) for secretory production, and a δ-sequence for integration of β-1,3-glucanase. The pRSδ-exgA plasmid was transformed into the S. cerevisiae BY4742△exg1 strain, and β-1.3-glucanase was stably overexpressed and secreted. Another plasmid, pRSδK-exgA, was introduced into the S. cerevisiae BY4742△exg1 (YKY082) strain, and overexpression of β-1,3-glucanase was examined by inducible integration under geneticin selection. The activity of β-1,3-glucanase increased in accordance with a rise in the geneticin concentration, with 0.8 mg/ml of geneticin suitable for overexpression of β-1,3-glucanase. Subsequently, pRSδK-exgA was repeatedly transformed for sequential δ-integration. The activity of β-1,3-glucanase reached about 0.063 unit/ml/OD600, 0.095 unit/ml/OD600, 0.131 unit/ml/OD600 and 0.165 unit/ml/OD600 by the first, second, third, and fourth round of integration, respectively. According to the increase in the activity of β-1,3-glucanase by sequential δ-integration, the copy number (integration rate) of the EXGA gene also increased in various chromosomes. These results suggest that recombinant β-1,3- glucanase activity can be sequentially increased by repeated δ-sequence integration.
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연월일 | 이력구분 | 이력상세 | 등재구분 |
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2027 | 평가예정 | 재인증평가 신청대상 (재인증) | |
2021-01-01 | 평가 | 등재학술지 유지 (재인증) | KCI등재 |
2018-01-01 | 평가 | 등재학술지 유지 (등재유지) | KCI등재 |
2015-01-01 | 평가 | 등재학술지 유지 (등재유지) | KCI등재 |
2011-08-03 | 학술지명변경 | 외국어명 : Korean Journal of Life Science -> Journal of Life Science | KCI등재 |
2011-01-01 | 평가 | 등재학술지 유지 (등재유지) | KCI등재 |
2009-01-01 | 평가 | 등재학술지 유지 (등재유지) | KCI등재 |
2007-01-01 | 평가 | 등재학술지 유지 (등재유지) | KCI등재 |
2004-01-01 | 평가 | 등재학술지 선정 (등재후보2차) | KCI등재 |
2003-01-01 | 평가 | 등재후보 1차 PASS (등재후보1차) | KCI후보 |
2001-07-01 | 평가 | 등재후보학술지 선정 (신규평가) | KCI후보 |
기준연도 | WOS-KCI 통합IF(2년) | KCIF(2년) | KCIF(3년) |
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2016 | 0.37 | 0.37 | 0.42 |
KCIF(4년) | KCIF(5년) | 중심성지수(3년) | 즉시성지수 |
0.43 | 0.43 | 0.774 | 0.09 |
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