연구보문 : 자연과학 ; 고추바이러스들의 동시 검출을 위한 새로운 즙액 추출 용액의 개발 = Research Papers : Natural Science ; Development of a Novel Sap Extraction Buffer for Simultaneous Detection of Pepper Viruses using VC/RT-PCR

국문 초록 (Abstract)

바이러스 입자를 감지하는 역전사 핵산 연쇄 증폭법 (VC/RT-PCR)은 감염된 식물종들로부터 핵산 추출 없이 식물바이러스들을 검출 할 수 있다. 본 연구는 VC/RT-PCR 분석법을 이용하여 고추를 감염시키는 바이러스들을 효과적으로 진단하기 위하여 새로운 즙액 추출 완충액들이 제작하였다. 토마토반점위조바이러스 (Tomato spotted wilt virus; TSWV), 고추약한모틀바이러스 (Pepper mild mottle virus; PMMoV) 및 고추모틀바이러스 (Pepper mottle virus; PepMoV) 진단을 위한 가장 최적화된 추출 완충액은 0.5% sodium sulfate를 포함하는 1.0M Tris (pH 8.0) buffer였다. 고추 바이러스들은 담배 즙액 추출 후 7일까지 검출이 되었으며, 마쇄 직후와 검출 감도는 유의한 차이가 없었다. 반면에, 3가지 고추 바이러스들은 고추 즙액 추출 후 2일까지만 바이러스들이 검출되었으며, 검출 감도는 크게 감소하였다. 국내 고추 재배 농가들에서 수집한 고추 시료들에서 TSWV, PMMoV, PepMoV의 단독 감염 및 PMMoV와 PepMoV의 중복 감염을 선발된 최적 즙액 완충액과 VC/RT-PCR의 조합을 이용하여 동시 진단이 가능하였다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

Virion-captured reverse transcription polymerase chain reaction (VC/RT-PCR) is able to detect plant viruses without extraction of total nucleic acids from infected plant species. Novel extraction buffers were developed and optimized for the efficient diagnosis of pepper-infecting viruses using VC/ RT-PCR analysis. The most optimal extraction buffer to detect Tomato spotted wilt virus (TSWV), Pepper mild mottle virus (PMMoV), and Pepper mottle virus (PepMoV) was 1M Tris (pH8.0) buffer containing 0.5% sodium sulfate. The three viruses in the optimal buffer could be detected from tobacco (Nicotiana rustica) until 7 post-extraction, showing no significant difference in detection sensitivity of viruses. Meanwhile, the three pepper-infecting viruses in the optimized buffer could be detected from pepper plants until 2 post-extraction, showing significant decrease in detection sensitivity. Single infection of TSWV, PMMoV, or PepMoV and mixed infection of PMMoV and PepMoV were simultaneously detected from pepper plants collected from domestic farms using the combination of the optimal buffer and VC/RTPCR.