목 적 : 물리적인 조건이 질 트리코모나스의 생존에 미치는 영향과 질 트리코모나스에 효과적인 약제를 탐색하여 metronidazole 내성균주의 치료에 이용할 수 있는 가능성을 알아보고자 하였다.
방 법 : 약제의 질 트리코모나스 원충에 대한 최소치사농도와 약제의 병합효과를 측정하기 위하여 소형원심분리기용 원침튜브를 이용한 튜브희석법을 사용하였다. 물리적 조건이 원충의 운동성과 생존에 미치는 영향을 측정하기 위하여 Neubauer's haemocytometer와 슬라이드글라스 현미경 관찰법과 한천희석 배양법을 병용하였다.
결 과 : 질 트리코모나스 원충에 대한 metronidazole 의 최소치사농도는 내성 기준인 3.1μg/ml보다 높은 8μg/ml 이었으며 tinidazole 의 경우에는 2μg/ml 이었다. Gentian violet, doxycycline, quinacrine 2HCI의 최소치사농도는 각각 62.5, 125, 125 μg/ml 이었다. 이 약제들은 metronidazole 내성인 질 트리코모나스 원충의 치료를 위한 대체 가능한 질 좌약으로 생각된다. 질 세정제로 사용되는 povidone-iodine의 최소치사농도는 제약회사들의 권장 사용량인 300μg/ml 보다 높은 500μg/ml 인 반면, 소독제인 benzalkonium chloride 는 512배 희석액에서 10분 이내에 모든 원충을 사멸시키는 강한 항 질 트리코모나스 효과를 나타냈다. Benzalkonium chloride 의 최소치사농도는 부인과 영역에서 사용되는 통상 용량인 200배 희석액의 5배에 해당하는 1024배 희석액이었다. 아연은 항 질 트리코모나스 효과를 갖고 있으며, 정상 남성의 전립선 분비액 내 농도는 평균 4.5 내지 7 mM 이다. T. vaginalis(CHO-3)에 대한 아연의 최소치사농도는 평균치보다 낮은 2.19 mM 이었다. Checkerboare 희석법을 이용한 약제의 병합효과 실험에서 아연과 gentian violet 의 병합은 FICI(fractional inhibitory concentration index)가 0.4 로써 상승적 효과를 보였으며, quinacrine 2HC1 과 gentian violet 의 병합시 FICI 는 0.8 로써 부가적인 효과를 나타냈다. T.vaginalis의 운동성은 pH 를 3.0 으로 조정한 modified-Diamond 배지에서 3시간 후에 100% 상실되었으나, 한천 희석 배양에서 집락의 수는 pH 3.0 충격군과 인산 완층식염수 대조군 사이에 별다른 차이가 없었다. T.vaginalis 는 10-15℃ 에 노출시 전 균주가 8시간이상 운동성을 유지하였다. 인산완충식염수로 세척한 T.vaginalis를 증류수와 혼합했을 때 전 균주가 3-6분 이내에 세포막이 파열되어 내용물이 쏟아져 나왔다. 이것은 이 원충이 삼투압의 차이에 매우 민감하다는 것을 의미한다.
결 론 : 이상의 연구결과를 분석할 때 질내의 산도를 낮추는 민간요법으로는 완치를 기대할 수 없다고 본다. gentian violet, doxycycline, quinacrine 2HC1 은 5-nitroimidazoles에 내성을 보이는 균주의 치료에 대체 가능한 질 좌제로 생각한다. 특히 zine 화합물과 gentian violet 의 병용시 상승적으로 작용하는 결과로 미루어 두 약제를 혼합한 질좌제의 상업적 이용도 가능할 것으로 사료된다. 산부인과에서 흔히 사용되고 있는 benzalkonium chloride는 원충에 대하여 탁월한 효과를 보이는 반면, povidone-iodine 의 경우 사용권장량에서 원충을 사멸시키지 못하였음은 주목할 만한 사실이다.
Background : Vaginal trichomoniasis is the most prevalent sexually transmitted disease in the world. According to reports, annually 150,000,000 persons have been infected in the whole world. Vaginal trichomoniasis is known to be one of predisposing factors causing low birth weight infant, preterm labor, premature rupture of membranes and bacterial vaginosis. Recently, appearance of resistant strains to 5-nitroimidazoles has been reported frequently by foreign researchers. But in Korea, there are few researchers having interest to Trichomonas vaginalis, and only papers under 10 were reported during 10 years past. We exploited drugs, disinfectants and drug combination usable alternatively to 5-nitroimidazole resistant strains. We also studied effects of several physical conditions to viability and motility of T. vaginalis.
Methods : Metronidazole resistant CHO-3 wild strain isolated in local clinic was used for measurement of minimal lethal concentration(MLC) and combined drug effect were tested by microcentriuge tube dilution method under anaerobic conditions. Motility and viability of T. vaginalis were tested by Neubauer's haemocytometer and slide glass with cover glass on the compound microscope.
Results : MLC of metronidazole to T. vaginalis (CHO-3) was 8μg/ml which has higher than resistant MLC threshold of 3.1μg/ml and 2μg/ml in case of tinidazole. MLCs of gentian violet, doxycycline and quinacrine 2HCI were 62.5, 125, 125μg/ml, respectively. It suggests that these drugs are useful as alternative suppositaries for metronidazole resistant T. vaginalis. MLC of povidone-iodine used as vaginal cleansing agent was 500μg/ml higher than 300μg/ml, the dose recommended by a pharmaceutical company, while the disinfectant, benzalkonium chloride, had strong antitrichomonal effect with the ability to kill all protozoae within 10 minutes in 512x diluent less. MLC of benzalkonium chloride was 1024x diluent equivalent to 1/5 of 200x diluent which is an usual dose on Department of Gynecology. Zinc has an antitrichomonal effect, and physiological concentrations of zinc in the prostatic secretions of normal men range from 4.5 to 7mM with mean value. MLC of zinc to T. vaginalis(CHO-3) was 2.19mM below mean values. In the experiment of combined drug effect by checkerboard tube dilution method, zinc and gentian violet combination showed synergistic effect with FICI(fractional inhibitory concentration index)
0.4 and quinacrine 2HC1 and gentian violet combination showed additive effect with FICI 0.8. The motility of T. vaginalis was completely lost in the pH 3.0-modified Diamond's medium after exposure for 3 hours, but the colony counts recovered on agar dilution cultures were little different between pH 3.0 shock group and PBS control group. All of T. vaginalis has maintained their motility for more than 8 hours at 10-15℃. After mixing of distilled water and T. vaginalis pellet washed with PBS, cell membrane rupture of all protozoae took place within 3-6 mins and contents were dicharged. It means that T. vaginalis is very sensitive to the low osmotic pressure.
Conclusion : We found that some drugs and two drug combinations had alternative
therapeutic effects to T. vaginalis. Benzalkonium chloride used in Department of
Gynecology had very strong trichomonacidal effect but povidone-iodine
(zinobetadine) was little effective. Low pH(pH 3.0) has trichomonastatic effect but did not have trichomonacidal effect.
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