Construction of an E. coli Initiation-mutant Thioredoxin Gene by Site-directed Mutagenesis: An Alternative Translational Initiation for E. coli trxA Gene = Site-directed Mutagenesis에 의한 대장균 치오레독신 유전자의 번역시작 돌연변이체 제조 : 대장균 치오레독신 유전자 번역의 또다른 시작
저자
임창진 ; 임은주 ; 김영덕 ; 이동권 ; 홍순주 ; Lim, Chang-Jin ; Lim, Eun-Joo ; Kim, Young-Deug ; Rhee, Dong-Kwon ; Hong, Sun-Joo
발행기관
학술지명
권호사항
발행연도
1991
작성언어
English
자료형태
학술저널
수록면
488-496(9쪽)
제공처
소장기관
대장균 치오레독신 유전자에 대한 mRNA는 두 개의 잠재적인 번역시작 부위를 갖고 있는데, 그 중 하나는 잘 알려진 대장균 치오레독신보다 19개 아미노산이 더 많은 단백질을 합성할 수 있다. 하지만, 이 연장된 치오레독신의 존재가 아직까지는 밝혀진 바 없다. 두 시작 부위로부터의 translation을 분리 확인할 목적으로 두번째 ATG codon을 site-directed mutagenesis에 의하여 CTG로 바꾸었다. 제조된 번역시작 돌연변이체는 단지 연장된 치오레독신만을 생성하여, 대장균 치오레독신 유전자 mRNA의 또다른 번역시작을 입증하였다. 그 결과 존재가 증명된 연장된 치오레독신의 세포내 특성을 여러 측면에서 조사하였다. 이미 알려져 있는 치오레독신과 마찬가지로, 연장된 치오레독신은 T7 DNA polymerase의 한 subunit로 작용하였다. 그러나, methionine sulfoxide reductase의 cofactor로는 사용되지 않았다.
더보기The mRNA produced from the E. coli thioredoxin gene (trxA) contains two potential translational initiation sites, one of which could initiate the synthesis of a protein 19 amino acids longer than the E. coli well-known thioredoxin of 108 amino acid residues. However, the expression of extended thioredoxin was not yet confirmed. To dissect translations from two initiation codons, the second ATG codon was converted to CTG by site-directed mutagenesis. The initiation-mutant thioredoxin gene lacking the second ATG codon could produce only the extended thioredoxin, which prove another translational initiation from the first ATG codon of an E. coli trxA mRNA. In vivo characteristics of the extended thioredoxin were examined in the several aspects. Just like the well-known thioredoxin, the extended thioredoxin is able to serve as a subunit of T7 DNA polymerase. In contrast, it doesn't act as a cofactor for methionine sulfoxide reductase.
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