Rapid and Sensitive Detection of Candida albicans by Polymerase Chain Reaction = 종합효소연쇄반응에 의한 C. albicans의 신속한 검출
저자
Kim, Min Ja (고려대학교 의과대학 내과학교실) ; Suh, Jae Hong (고려대학교 의과대학 내과학교실) ; Chung, Hee Jin (고려대학교 의과대학 내과학교실) ; Kim, Woo Ju (고려대학교 의과대학 내과학교실) ; Park, Seung Chul (고려대학교 의과대학 내과학교실) ; Kim, Kyung A (고려대학교 이공대학 생물학과)
발행기관
학술지명
권호사항
발행연도
1996
작성언어
English
주제어
KDC
513.90
자료형태
학술저널
발행기관 URL
수록면
113-121(9쪽)
제공처
소장기관
목 적 : C. albicans 균혈증의 진단에 있어서 PCR검출법은 가장 좋은 방법으로 알려져 있으나 검체처리방법에 따라 민감도가 다르고, 일반적으로 ??개의 균수를 필요로 한다. 본연구는 검체처리과정중에 guanidium thiocyanate(GuSCN)하에서 DNA를 silica에 결합을 유도하여 template DNA의 회수정도를 증가시키므로써 C. albicans의 PCR검출법의 민감도를 향상시키고자 하였다.
방 법 : 일정수의 C. albicans가 접종된 생리식염수 또는 혈청검체로 부터 template DNA준비과정에서 silica/GuSCN 처리를 첨가한후 PCR을 시행하여, 단순 DNA 추출법만을 사용하여 PCR을 시행한 결과와 각각의 민감도를 비교하였다.
결 과 : 단순 DNA 추출법을 이용한 PCR검사 결과를 agarose gel 상에서 ethidium
bromide 염색으로 검색하였을 때 최소 3×10²세포수가 포함된 검체에서 127bp의 증폭산물이 관찰되었고 Southern hybridization법으로 검색하였을때 ?? 세포수가 포함된 검체에서도 증폭산물이 관찰되었다. Silica/GuSCN 법을 이용한 PCR검사결과는 ethidium bromide 염색으로 최소 ?? 세표수가 포함된 검체로 부터 증폭산물이 관찰되므로써 단순 DNA 추출법을 이용한 경우에 비하여 약 100배의 PCR검사의 민감도 향상을 나타내었다.
결 론 : Template DNA 준비과정에서 silica/GuSCN 처리를 첨가한 PCR검출법은 민감하고 신속한 PCR검출법의 하나로 사료되며, 장차 임상 혈액검체에서의 적용을 통해서 확인이 필요하다.
Background : The development of DNA-based methods for the detection of Candida species provides an alternative and potentially more sensitive means to diagnose disseminated candidasis. However, detection of C. albicans DNA recovered from clinical specimens, even after ploymerase chain reaction(PCR) amplification, lacks sensitivity and cumbersome for most laboratories. In the present study we tried to increase the sensitivity of PCR-based detection of C. albicans by binding DNA to silica(diatoms) under guanidium thiocyanate(GuSCN).
Method : Saline aliquots were inoculated with serially diluted C. albicans from a culture. Template DNA was prepared from spheroplasts by simple DNA extraction
method with or without treatment of silica under GuSCN (silica/GuSCN). After
amplification of DNA with a pair of species-specific primers derived from C. albicans DNA, PCR products were analysed by both ethidium bromide staining and Southern hybridization.
Results : A 127 bp DNA fragment was amplified by a pair of primers from C. albicans containing sera. The detection limit of the PCR assay using proteinase K and detegent for preparation of template DNA was shown to be approximately 3×10²cells in 0.1 ml by ethidium bromide staining and ?? cells by Southern analysis. The addition of silica/GuSCN treatment in preparing tempalte DNA raised the sensitivity of detection of C. albicans to about ?? cells per 0.1 ml by ethidium bromide staining.
Conclusion : These results indicate that PCR system using silica/GuSCN treatment is a rapid and sensitive method for the detection of C. albicans, suggesting its potentials for application in clinical samples from patients with candidiasis.
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