Effects of Fertilization Time and Culture Medium of Pig Oocytes Matured In Vitro by Liquid Boar Sperm Stored at 4℃ = 체외성숙된 돼지난포란을 4℃ 보존 액상정액으로 체외수정시 수정시간과 배양배지의 영향
저자
Park, C.S. (Division of Animal Science & Resources, Research Center for Transgenic Cloned Pigs, Chungnam National University) ; Yi, Y.J. (Division of Animal Science & Resources, Research Center for Transgenic Cloned Pigs, Chungnam National University) ; Kim, M.Y. (Division of Animal Science & Resources, Research Center for Transgenic Cloned Pigs, Chungnam National University) ; Chang, Y.J. (Division of Animal Science & Resources, Research Center for Transgenic Cloned Pigs, Chungnam National University) ; Lee, S.H. (College of Visual Image & Health, Kongju National University) ; Jin, D.I (Division of Animal Science & Resources, Research Center for Transgenic Cloned Pigs, Chungnam National University)
발행기관
학술지명
권호사항
발행연도
2004
작성언어
English
주제어
KDC
630
자료형태
학술저널
수록면
394-402(9쪽)
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※ 저작자의 요청에 따라 해당 논문은 원문이 제공되지 않습니다.
This study was to investigate the effects of fertilization time and culture medium of pig oocytes matured in-vitro by liquid boar sperm. The sperm rich fraction (30∼60 ml) was slowly cooled to room temperature (20∼23℃) by 2 h after collection. Semen was transferred into 15 ml tubes, centrifuged at room temperature for 10 min 800×g, and the supernatant solution was poured off. The concentrated sperm was resuspended with 5 ml of the LEN diluent to provide 1.0×10^(9) sperm/ml at room temperature. The resuspended semen was cooled in a refrigerator to 4℃. The medium used for oocyte maturation was TCM-199 supplemented with 26.19 mM sodium bicarbonate, 0.9 mM sodium pyruvate, 10μg/ml insulin, 2μg/ml vitamin B_(12), 25 mM HEPES, 10μg/ml bovine apotransferrin, 150μM cysteamine, 10IU/ml PMSG, 10 IU/ml hCG, 10 ng/ml EGF, 0.4% BSA, 75μg/ml sodium penicillin G, 50μg/ml streptomycin sulfate and 10% pFF. After about 22 h of culture, oocytes were cultured without cysteamine and hormones for 22 h at 38.5℃, 5% CO₂in air. Oocytes were inseminated with liquid boar sperm stored at 4℃ for 2 days after collection. Oocytes were coincubated for 1, 3, 6 and 9 h in 500 μl mTBM fertilization media with 1.0×10^(6) sperm/ml concentration, respectively. Thereafter, oocytes were transferred into 500 μl NCSU-23, HEPES buffered NCSU-23, PZM-3 and PZM-4 culture media, respectively, for further culture of 6, 48 and 144 h. The rates of sperm penetration and male pronuclear formation were higher in the fertilization times for 6 and 9 h than in those for 1 and 3 h. The rates of cleaved oocytes were higher in the fertilization times for 6 and 9 h (85.0 and 84.6%) than in those for 1 and 3 h (61.1 and 76.8%). The percentage of blastocyst formation from the cleaved oocytes was highest in the fertilization time for 6 h (33.6%) than in that for 1, 3 and 9 h (11.4, 23.0 and 29.6%). Mean cell numbers per blastocyst were 32.9, 27.6, 26.3 and 24.4 in the fertilization times for 6, 9, 3 and 1 h, respectively. The rate of blastocyst from the cleaved oocytes and the number of cells per blastocyst were higher in HEPES buffered NCSU-23 culture medium than in NCSU-23, PZM-3 and PZM-4 culture media. In conclusion, we found out that liquid boar sperm stored at 4℃ could be used for in-vitro fertilization of pig oocytes matured in-vitro. Also, we recommend the coincubation time of 6 h in 500 μl TBM fertilization medium with 1×10^(6) sperm/ml concentration and the HEPES buffered NCSU-23 culture medium for in-vitro fertilization of pig oocytes matured in-vitro.
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