KCI등재후보
Soft Agar Assay를 이용한 배양골조직과 골세포의 Transforming Growth Factor-β유리에 관한 연구 = Transforming Growth Factor-β Activity in Conditioned Medium of Cultured Bone Explants and Bone Cells
저자
백정화 (서울대학교 치과대학 치과약리학교실 ) ; 김관식 (서울대학교 치과대학 치과약리학교실 ) ; 정동균 (서울대학교 치과대학 치과약리학교실 )
발행기관
학술지명
International Journal of Oral Biology(International Journal of Oral Biology)
권호사항
발행연도
1991
작성언어
Korean
주제어
KDC
515.000
등재정보
KCI등재후보
자료형태
학술저널
발행기관 URL
수록면
124-132(9쪽)
제공처
To study the effect of PTH, osteotropic hormone, on the TGF-β activity in conditioned medium prepared from bone explants, fetal rat ulnae and radii were removed at 19-day of gestation and organ cultured for 24 hours. Then media were changed with fresh BGJb media for control group or PTH-supplemented media (50 or 200 ng/㎖) for experimental group respectively and conditioned media were prepared by 2-day culture of explants. To study the cellular orgin of matrix-associatied TGF-β and the effect of PTH on the TGF-β activity in conditioned media prepared from bone cells, five bone cell populations were prepared from fetal rat calvaria by sequential enzyme digestion. After primary culture, each bone cell population was collected and resuspended as Ⅰ-Ⅱ, Ⅲ and Ⅳ-Ⅴ groups. After 24 hours, media were changed with fresh minimum essential medium(MEM) or 600 ng/㎖ PTH-supplemented media and conditioned media were prepared by 2-day culture. For activation of latent TGF-β activity in bone cell-conditioned media, media were acidified and then neutralized. TGF-β activities of conditioned media were measured by anchorage-independent growth of NRK fibroblasts using modified Todaro soft agar assay method(1987) and the number of colonies ≥ 50 ㎛ was counted. The observed results were as follows.
1. TGF-β, without 2 ng/㎖ EGF, did not induce colony formation in soft agar suspensions.
2. With 2 ng/㎖ EGF, TGF-β induced NRK cells to form large colonies in soft agar suspensions and colony numbers increased proportionally to TGF-β concentrations from 50 pg/㎖ to 1600 pg/㎖.
3. When ulnae and radii were incubated with 50 ng/㎖ PTH, TGF-β activity in conditioned media was not significantly different from control conditioned media. In contrast, TGF-β activity in conditioned media prepared from culture with supplementation of 200 ng/㎖ PTH, was significantly increased(p < 0.01).
4. TGF-β activity was detectable in all bone cell populations and the amount was not significantly different between cell populations.
5. When bone cell populations were incubated with 600 ng/㎖ PTH. TGF-β activity in conditioned media from each population was not significantly different from control conditioned media.
These results suggest that all cell populations isolated from calvaria synthesize TGF-β and PTH has no apparent effects on the TGF-β production of bone cell populations. In addition, increased TGF-β activity in bone explant conditioned media by 200 ng/㎖ PTH appears to be due to the enhanced release of TGF-β from bone matrix secondary to bone resorptive process.
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