Clomiphene Citrate가 Mouse 卵子의 성숙 및 초기 胚芽의 發生에 미치는 영향 = The Effect of Clomiphene Citrate on the Mouse Oocyte Maturation and Early Embryo Development in vivo and in vitro
저자
崔勳 (仁濟大學 大學院 醫學科)
발행기관
학술지명
권호사항
발행연도
1988
작성언어
Korean
주제어
KDC
510.000
자료형태
학술저널
수록면
81-93(13쪽)
제공처
소장기관
본 실험은 clomiphene cirate(이하 CC이라 함)가 ICR계 mouse의 미성숙 난자의 성숙, 배란 및 초기 배아의 발생에 미치는 영향을 밝히기 위하여 시행하였다.
CC가 난자의 성숙에 미치는 영향을 관찰하기 위하여 획득한 미성숙 난자를 CC가 함유되지 않은 배양액과 CC의 농도가 10,50, 그리고 100㎍/m1인 배양액에 각각 20시간 동안 5% 탄산가스와 95% 공기가 공급되는 37℃배양기에서 배양하였다. 각 실험에 소요된 난자의 수는 100∼150개이었다.
CC가 배란 및 포기 배아의 발생에 미치는 영향을 관찰하기 위하여 pregnat mare's serum gonadotropin(이하 PMSG이라 함)과 human chorionic gonadotropin(이하 hCG이라 함)의 병용요법(제1일째 ; PMSG주사, 5 IU, 제3일째 ; hCG주사, 5 IU)으로 과배란을 유도한 mouse를 4군(제1군; PMSG/ hCG, 제2군 ; PMSG+CC / hCG, 제3군 ; PMSG / hCC+CC, 제4군 ; PMSG+CC / hCG+CC)으로 나누었다. CC의 투여는50㎍/g을 피하주사하였다. 각 군에서 교미 유무를 기록하였으며 hCG 주사 후 27시간 또는 48시간이 경과된 후 수정란 및 2세포기 배아를 재취하였다. 각군의 실험에 5마리의 mouse를 이용하였으며 이를 3회 이상 반복하였다.
또한 CC가 포기 배아의 발생에 미치는 영향을 관찰하기 위하여 PMSG와 hCG로 과배란을 유도한 mouse로부터 획득한 수정란을 CC가 함유되지 않은 배양액과 CC의 농도가 10,50, 그리고 100㎍/ml인 배양액에 각간 72시간 동안 5% 탄산가스와 95% 공기가 공급되는 37℃ 배양기에서 배양하였으면 각 실험에 소요된 수정란의 수는 100∼150개 이었다.
배양액으로는 standard egg culture medium을 이용하였다. 실험이 끝난 난자와 초기 배아를 0.5% aceto-orcein으로 염색하여 핵형 및 분할 정도를 관찰하였다.
결과는 다음과 같다.
1.미성숙난자의 성숙은 배양액 내 CC의 농도가 높을수록 저하되었으며(p<0.01), 또한 난자의 퇴화는 배양액 내 CC의 농도가 높을수록 증가하였다(p<0.01).
2.PMSG로 유도된 주기 동안 CC로 처리한 mouse에서의 교미율은 CC로 처리하지 않은 군에비해 의의있게 저하하였다(p<0.05).
3.PMSG로 유도된 초기 여포기에 CC로 처리한 군에서의 배란율 및 초기 배아 발생율은 의의있게 낮았으나(P<0.01), 유도된 배란 전기에 hCG와 CC로 동시에 처리한 군에서는 배란율 및 초기 배아 발생율은 CC로 처리하지 않은 군에 비해 유의한 차이가 없었다.
4.PMSG로 유도된 초기 여포기 혹은 배란 전기에 CC로 처리한 군에서의 1세포기 배아 및 2세포기 배아의 퇴화율은 각각 유의하게 높았다(각각 p<0.05, p<0.01).
5.수정란의 배양시 2세포기 배아 발생율은 CC가 함유되지 않은 배양액에 배양한 군에 비해 CC의 농도가 10㎍/ml인 배양액에 배양한 군에서는 유의한 차이가 없었으나 CC의 농도가 50, 100㎍/ml인 배양액에 배양한 관에서는 유의하게 낮았다(p<0.01). 초기 배아의 퇴화율은 배양액 내 CC의 농도가 높을수록 유의하게 높았다(P<0.01).
이상의 결과로 보아 mouse 난자 및 초기 배아가 CC에 노출된 경우 CC가 난자의 성숙, 배란 및 배아의 발생에 해로운 영향을 미치는 것을 관찰하였다. 이러한 CC의 영향은 에스트로겐에 대한 길항 작용에 의한 것으로 추측된다.
This study used ICR strain mouse to examine the effect of clomiphene citrate (CC) on the maturation of immature occytes, the ovulatinn and early embryo development in vivo and in vitro.
To examine the effect of CC on oncyte maturation in vitro, the immature mouse oocytes retrieved were incubated under 5% of CO2 at 37℃ condition for 20 hours in control or CC-supplemented culture medium containing 10, 50 and 100㎍/ml of CC. For each concentration tested, 100 to 150 immature oocytes were examined.
Te examine the effect of CC on the ovulation and early embryo development in vivo, the mice induced superovulation with pregnant mare's serum gonadotropin (PMSG) / human chorionic gonadotropin (hCG) regimen (day 1 being the day of PMSG. 5 IU injected and day 3. the day of ovulation by hCG 5 IU) were divided into 4 groups (Group 1 : PMSG/hCG, Group 2, PMSG +CC/hCG, Group 3; PMSG/hCG +CC, Group 4; PMSG + CC / hCG +CC). CC was injected in the dose of 50㎍/g subcutaneously.
The rates of successful copulation were recorded, and the fertilized eggs and two cell embryos were retrieved 27 hours or 48 hours, respectively, after hCG infection. Five mice were tested for each group, which was repealed more than three times.
To examine the effect CC on the early embryo development in vitro, the fertilized eggs retrieved from mice induced superovulation with PMSG / hCG regimen were incubated under 5% CO2 at 37℃ condition for 72 hours in control or CC-spplemented fulture medium containing 10, 50, and 100㎍/ml of CC. For each concentration tested, 100 to 150 fertilized eggs were examined. Standard egg culture medium was used as culture medium.
After examination. the oocytes and early embryos were stained with 0.5% aceto-orcein to evaluate chromosome phase and cleavage.
The results were as follows ;
1.The maturation of immature oocytes declined and the degeneration of oocytes inclined in a dose-dependent
fashion when CC was added to the culture media (p<001).
2.The mice treated with CC during PMSG-induced cycle demonstrated a decrease in the rates of successful coupulation as compared to those without CC(p<0.05).
3.When CC was administered in the early follicular phase of PMSG-induced cycle, a decrease was seen in the rate of ovulation and early embryo development (p<0.01). However, no effect was seen when the drug was administered with concomitant hCG injection in the preovulatory phase of induced cycle.
4.When CC was administered in the early follicular phase and / or in the preovulatory phase of induced cycle, an increase was seen in the degeneration rates of one cell emvryo(p<0.05) as well as two cell embryo (p<0.01).
5.The two embryo formation of fertilized eggs declined in a dose dependent fashion when CC was added to the culture media in concentrations ≥50㎍/ml (p<0.01). The degeneration of early embryo inclined in a dose-dependent fashion when the drug was added to the culture media (p<0.01).
The results suggest that oocyte maturation, ovulation, and embryo growth rates are affected by exposure of the mouse oocyte-early embryo to CC. These adverse effects of CC may be due to its antiestrogenic properties.
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