제대혈 조혈모세포 분리를 위한 적혈구 제거 방법에 관한 연구 = Study on Red Cell Depletion Technique for Separation of Umbilical Cord Blood Stem Cell
저자
서원석 (순천향대학교 의과대학 소아과학교실 및 임상분자생물학연구소) ; 김숙자 (순천향대학교 의과대학 임상분자생물학연구소) ; 정희정 (순천향대학교 의과대학 임상분자생물학연구소) ; 박경배 (순천향대학교 의과대학 소아과학교실) ; 박성규 (순천향대학교 의과대학 내과학교실 및 임상분자생물학연구소) ; 원종호 (순천향대학교 의과대학 내과학교실 및 임상분자생물학연구소) ; 홍대식 (순천향대학교 의과대학 내과학교실 및 임상분자생물학연구소) ; 박희숙 (순천향대학교 의과대학 내과학교실 및 임상분자생물학연구소) ; 신상만 (순천향대학교 의과대학 소아과학교실)
발행기관
학술지명
권호사항
발행연도
1998
작성언어
Korean
KDC
510.000
자료형태
학술저널
수록면
53-62(10쪽)
제공처
연구배경 :현재까지 제대혈 은행에서 적혈구 제거후에 냉동 보관 방법이 보편화되지 못한 것은 Ficoll, lysis, starch와 중력에 의한 방법 등이 약 50-90%에 이르는 조혈모세포가 손실된다는 이유 때문이다, 따라서 대부분의 제대혈 은행에서 전체 제대혈을 냉동보관 후에 이식에 사용하고 있다. 지금까지의 보고들은 서로 다른 제대혈에서 여러 가지 방법으로 적혈구제거를 실시한 것으로 결과가 서로 큰 차이가 난다.
방법 : 저자는 같은 제대혈에서 Ficoll, gelatin, methylcellulose, RBC lysis 등의 방법으로 적혈구를 제거하여 다음과 같은 결과를 얻었다.
결과:
1) 채취한 평균 제대혈량은 105±23ml,단핵구수는 18.6±4.09×10^(6)/ml이었다.
2) 각각의 방법으로 적혈구를 제거한 다음의 단핵구수는 Ficoll, 방법 4.43±1.50×10^(6)/ml, gelatin방법 7.71±0.37×10^(6)/ml, methylcellulose 방법 5.90±0.51×10^(6)/ml, RBC lysis방법10.72±2.74×10^(6)/ml개 였으며 이 중 RBC lysis방법에서 단핵구 수가 가장 많았다.
3) 각각의 방법으로 적혈구를 제거한 다음 flow cytometry로 측정한 CD34 양성세포 수는 Ficoll 방법 2.65±0.52×10⁴/ml, gelatin방법 3.50±0.43×10⁴/ml, methylcellulose방법 2.71±0.23×10⁴/ml, RBC lysis방법 9.36±1.62×10⁴/ml개 였으며 이 중 RBC lysis방법에서 CD34양성세포 수가 가장 많았다. 전체 세포에 대한 CD34양성세포의 비율을 보면 Ficoll방법 0.72±0.14, gelatin 방법 0.50±0.08%, methylcellulose 방법 0.44±0.03%, RBC lysis방법 0.79±0.04%였다.
4) CFC수는 Ficoll 방법 21.73±11.77×10³/ml, methylcellulose 방법 15.33±7.14×10³/ml, RBC lysis 방법 26.50±4.26×10³/ml개 였으며 이 중 RBC lysis 방법에서 CFC수가 가장 많았다.
결론 : 이상의결과로 보나 Ficoll, nethylcellulose, gelatin, RBC lysis 등의 방법을 이용하는 경우 모두 적혈구 제가가 잘 되었으며 특히 RBC lysis방법을 이용한 경우 가장 많은 CD34양성세포 수와 CFC수를 얻어 적혈구 제거 방법으로 가장 좋았다. 하지만 다른 보고들에서는 gelatin에 의한 방법이 좋다고 하였는데 이는 실험 방법의 차이에 의한 것으로 보여 이에 대한 연구가 좀 더 많은 례에서 이루어져야 할 것으로 사료된다.
Background : Human umbilical cord blood (UCB) has been successfully used as an althemative source of allogeneic hematopoietic stem cells for pediatric transplantation. A bank of cryopreserved UCB has the advantage over existing volunteer marrow donor registries because time consuming donor tracing can be avoided. Efficient clinical banking of UCB requires volume reduction of cord blood collections to decrease storage space and costs. The simplest way to achieve this is no deplete cord blood red cell before cryopreservation.
Methods : We compared four different red cell depletion techniques, Ficoll, gelation, methylcelulose and red cell lysis method in terms of mononuclear cell count, CD34-positive cell count and colony forming cell (CFC) count.
Results :
1) Mean volume and mononuclear cell count of collected UCB were 105±23mL and 18.63±4.09×10^(6)/mL.
2) Among different red cell depletion techniques, red cell lysis mothod showed the highest yeild of mononuclear cell counts, CD34-positive cell counts and CFC counts.
Conclusion : Cord blood collection processed with red cell lysis could provide enough stem cells for engraftment but other studies revealed different result. This may be due to the different study method. We concluded that RBC lysis method is effective for the red cell depletion of cord blood without major losses of CFC or CD34-positive cells.
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