가톨릭 제대혈모세포은행 현황 : 1,000 units에 대한 분석 Analysis of 1000 UCB units at The Catholic Umbilical Cord Bank = Umbilical Cord Blood Banking in Korea
배경:제대혈에는 다량의 조혈모세포가 함유되어 있으며 조혈모세포이식시 HLA가 일치하지 않는 경우에도 심각한 GvHD를 나타내지 않는 것으로 알려져있다. 또한 골수 채집 시 안고있는 공여자에 대한 위험이 전혀 없으며 항시 사용준비 상태로 냉동 보관 되어져 있으므로 필요시 즉시 환자에게 적용할 수 있는 장점을 가지고 있다. 이러한 이유로 조혈모세포이식시 제대혈의 이용빈도가 증가되고 있는 추세이다. 따라서 세계 각국에서는 제대혈 모세포은행이 설립되어 운영되어지고 있다. 이러한 세계적 추세와 국내에서 점점 확대되어지고 있는 조혈모세포이식의 대상과 수요를 감당하기 위해 1996년에 가톨릭 제대혈모세포은행이 설립되어 12건의 제대혈 조혈모세포이식을 주도하였으나 많은 임상가들을 위한 가이드가 없으므로 본은행 제대혈 units를 분석하여 보고하고자 한다.
방법:제대혈의 수집은 만삭아 분만시 전문 간호사에 의해 태반이 분리되기 전에 제대정맥으로부터 채취하였다. 채집한 제대혈 unit는 검사에 필요한 최소한의 양(1 ml)을 제외한 나머지 혈액 전량이 부피 축소 과정을 거친 후 냉동과정을 거쳐 196℃ 이하에 보관되었다. 세포생존능력과 제대혈 단핵구에 포함된 CD34+세포의 비율을 분석하기 위하여 5% human albumin 용액과 5% Dextran 40 용액을 이용하여 해동된 후 tryphan blue dye exclusion 법과 FACS 분석을 실시하였고 미생물에 대한 오염의 확인은 Thioglycollate 배지와 Brain heart infusion agar 배지를 이용하여 검사하였으며 HLA는 HLA-A, B, C 그리고 DR 모두 DNA 수준에서 모두 확인하였다.
결과:제대혈의 평균부피는 82.7 ml이 었고 부피축소 과정을 통해 약 70%의 부피가 감소되어 평균 저장 부피는 23.2 ml이었다. 제대혈 unit 당 단핵구의 수는 5.0~26.1×10^(8) 범위였고 평균 8.81×10^(8)였다. 제대혈 unit의 단핵구 내에 존재하는 CD34+세포의 비율은 평균 2.7%였고 CD34+CD38-세포는 평균 1.0%였으며 해동 후 단핵구 생존율은 83.4%였다. 제대혈 1,000 unit 중 미생물 오염이 확인된 unit는 모두 10개로 0.1%의 오염율을 나타내었다.
결론:1996년에 설립된 가톨릭 제대혈모세포은행은 2000년 3월 현재 1,600 제대혈 unit를 보유하고 있으며 단핵구의 숫자나 CD34+세포의 수 모두 타 연구기관의 결과와 비슷하여 조혈모세포 공급원의 확대에 기여함을 알 수 있었고 일부 HLA 유전자가 일치하지 않아도 이식이 가능한 점을 고려하면 빠른 시일 안에 저 체중 환자를 위한 보완방법으로 사용되어 질 것이다.
Background:Umbilical cord blood (UCB) is rich in hemopoietic progenitor cells and the transplantation of these cells is associated with a low risk of acute and chronic GvHD. The collection of UCB poses no risk to the donor and it can be stored fully tested and HLA typed in the frozen state, available for immediate use. In this reason, UCB is increasingly used as an alternative source of stem and progenitor cells for the reconstitution of bone marrow. To facilitate the provision of UCB units for transplantation, cord blood banks (CBB) have been developed worldwide. The Catholic Cord Blood bank has been established in 1996 and 12 cases of transplantation using UCB units were carried out. We reports the data of Catholic UCB units in order to guide for the researchers and clinicians who want to make use of UCB.
Methods:UCBs were collected, by well trained nurses, from the umbilical cord vein after delivery of the placenta to the collection bag containing CPD solution. Collected UCB units were processed to reduce the volume after sampling and were tested for microorganisms and HLA, and were freezed at a controlled rate with freezing machine, then cryopreserved under -196℃. To analysis the cell viability and CD34+ cell content in the mononuclear cells (MNC) of UCB unit, tryphan blue dye exclusion method and FACS were used. For testing of microbological contamination, thioglycollate media and brain heart infusion agar plates were used. HLA-A, B, C and DR were typed at DNA level.
Results:The mean volume of collected UCB units was 82.7 ml and the volume was reduced through the volume reduction process. The average volume of reduced UCB units was 23.2 ml. The numbers of MNC per UCB unit were within the range of 5.0~26.1×10^(8) cells and the mean number of MNC of UCB units was 8.81×10^(8) cells. After thawing of UCB, viability were showed more than 83.4%. CD34+ cell content of units was assessed to mean value of 2.7%. The fraction of CD34+CD38- cells had the range of 0.3~3.3% and the median value was 0.5%. Out of 1,000 UCB units, the contamination of 10 units were detected.
Conclusion:The Catholic Umbilical Cord Blood Bank which was established in 1996 stored 1,600 units. The quality of UCB units cryopreserved in the Catholic CBB was, which are increasing 120~150 units per month, confirmed to be no difference with UCB units of the foreign CBBs. And it is estimated that Catholic UCB could meet the domestic demands for transplantation under the circumstance of present situation of Korea.
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