Protease 생산성이 향상된 Bacillus natto 돌연변이주의 개발 = Mutant of Bacillus natto Hyper-producing Protease
저자
윤기홍 (식품생명공학부)
발행기관
학술지명
권호사항
발행연도
2000
작성언어
Korean
주제어
KDC
051.000
자료형태
학술저널
수록면
397-408(12쪽)
제공처
소장기관
청국장 발효균인 Bacillus natto의 protease 생산성이 향상된 변이주를 개발하기 위해 N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (NTG)를 사용하여 돌연변이를 유발하였다. 돌연변이는 B. natto의 사멸률이 90%가 되도록 중기대수기의 B. natto 배양액에 NTG를 100㎍/㎖ 첨가하여 10 분간 수행하였다. Protease 생산성이 우수한 변이주는 2% skim milk와 2% tween 20을 첨가한 LB 평판배지에서 형성된 콜로니 주변의 skim milk 분해환의 크기와 선명도를 관찰함으로써 선발하였다. 이로써 변이주 M8을 최종적으로 선발하였는데 M8은 모균주에 비해 액체배지에서 최대 성장정도가 약간 저하되었지만, protease 생산성은 8.3 배 증가한 것으로 나타났으며 최대 효소생산성은 46.4 U/㎖ 이었다. 또한 protease는 중기대수기를 지나면서 다량 생성되기 시작하였으며 정지기에 도달하여 그 생산성이 최대에 이르는 것으로 나타났다. 본 실험을 통해 개발된 변이주 M8은 protease 생산성이 향상되었으므로 콩 발효시 단백질의 분해력이 우수할 것으로 예상되며 청국장 발효균으로서의 가치가 높다고 판단된다.
Bacillus natto cells, natto-fermenting food microorganism, were mutagenized by N-methly-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (NTG) for increasing its protease productivity. Mutagenesis was performed by treating the B. natto cells with 100㎍/㎖ of NTG for 10 min, which caused approx. ninety percent of the cells to die. Mutant strains were isolated by scoring the size and transparency of halo formed around the colonies grown on LB a gar plates containing skim milk (2%) and tweeny 20 (2%). A mutant strain of protease hyper-producer, designated as M8, was finally obtained, and its growth and protease production were investigated. In flask cultures, growth pattern of M8 was similar to that of parent strain, though maximum growth level of M8 decreased little less. Nevertheless, the maximum protease production of mutant M8 was 46.4 U/㎖ corresponding to 8.3-fold increase over the parent strain. It was additionally found that the protease production of mutant M8 was done after mid-logarismic growth phase and reached maximum level at stationary phase. Increasement of its protease productivity is useful for the efficient hydrolysis of soybean protein, expecting that mutant M8 is a promising strain for natto.
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