Candida tropicalis로 부터 분리된 자율복제기점을 이용한 Candida maltosa와 Saccharomyces cervisiae에서의 shuttle-vector의 구축 = Construction of a shuttle-vector in Candida maltosa and Saccharomyces cervisiae by using an ARS fragment isolated from Candida tropicalis
저자
최용락 (동아대학교 농과대학 농화학과) ; 조영수 (동아대학교 농과대학 농화학과) ; 차재영 (경상대학교 농과대학 식품공학과)
발행기관
東亞大學校附設遺傳工學硏究所(The Genetic Engineering Research Institute Dong-A University)
학술지명
권호사항
발행연도
1994
작성언어
Korean
KDC
476.1
자료형태
학술저널
수록면
7-18(12쪽)
제공처
소장기관
무포자 효모인 Candida속의 효모는 aikane계 화합물을 이용하며 cellubiose나 xylose를 동화하는 등 산업적으로 이용가능성이 높다. Candida tropicalis는 세포질 인자인 plasmid가 발견되지 않으므로 염색체 유래의 자율복제기점을 non-replicative plasmid인 YIp5에 삽입시켜 S. cevisiae YNN 27에서 분리하였다. 분리된 자율 복제 기점을 Hind III과 EcoR I제한 효소로 절단하고 각각 2.7kb와 2.3kb fragment를 회수한 후 동일 제한 효소로 절단한 YIp5와 YIp32에 ligation시켜 pIKS523, pIKS527및 pIKC27을 구축하였다.
특히, pIKC27은 2.7kb의 자율복제 기점을 가진 plasmid로서 S. cerevisiae DBY746과 C.maltosa J288에서 높은 형질 전환체를 나타내었다. 기존의 plasmid와 안정성을 비교하였으며, 여러 제한효소에 의해서 얻어진 결과로서 상세한 restrition map을 작성하였다.
Candida species are special interest because of its ability to metabolize hydrocarbon, covet this material into single cell protein and assimilate cellobiose and xylose as substrate. Cadida tropicalis has no native plasmid similar to 2㎛ plasmid. Therefore, Candida tropicalis is regarded as a new yeast host. An 8-kb fragment was isolated from Sal I digest of Candida tropicalis IFO 0518 genomic DNA which conferred the property of autonomous replication in Saccharomyces cerevisiae YNN 27. The vectors for gene manipulation of Yeast, pIKS 523, pIKS 527 and pIKC 27, were constructed by combinding the ARS fragment and integration plasmid YIP 5 and YIP 32, respectively. One of the recombinant plasmids, pIKC 27 (9.4kb), was capable of autonomous replication in both S. cerevisiae DBY 746 to Leu+ at a frequency of 600 transformants per ㎍ DNA, and transformed Candida maltosa J288 to Leu+ at a frequency of 230 transformants per ㎍ DNA. These results indicate that the 2.7 kb ARS element was necessary for high frequency transformation and autonomous plasmid replication in both S. Cerevisiae and C. maltosa.
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