동종 골수 이식한 백혈병에서 단반복 유전자로 살펴본 혼합 키메라 현상의 의의 = Significance of Mixed Chimerism after Allogeneic Bone Marrow Transplantation for Leukemia by Short Tandem Repeats
저자
장대영 (울산대학교 의과대학 서울중앙병원 내과) ; 이정신 (울산대학교 의과대학 서울중앙병원 내과) ; 서철원 (울산대학교 의과대학 서울중앙병원 내과) ; 이규형 (울산대학교 의과대학 서울중앙병원 내과) ; 이제환 (울산대학교 의과대학 서울중앙병원 내과) ; 지현숙 (울산대학교 의과대학 서울중앙병원 임상병리과) ; 박찬정 (울산대학교 의과대학 서울중앙병원 임상병리과) ; 한면수 (국립과학수사연구소 유전자분석실) ; 최동원 (국립과학수사연구소 유전자분석실) ; 김정균 (울산대학교 의과대학 서울중앙병원 내과) ; 최성준 (울산대학교 의과대학 서울중앙병원 내과) ; 김성배 (울산대학교 의과대학 서울중앙병원 내과) ; 김상위 (울산대학교 의과대학 서울중앙병원 내과) ; 김우건 (울산대학교 의과대학 서울중앙병원 내과) ; 김상희 (울산대학교 의과대학 서울중앙병원 내과)
발행기관
학술지명
권호사항
발행연도
1998
작성언어
Korean
주제어
KDC
510.000
자료형태
학술저널
수록면
75-86(12쪽)
제공처
연구배경 : 동종 골수 이식한 백혈병에서 키메라 현상의 분석은 착상, 질병 재발과 이식 거부를 이해하는데 도움을 줄 수 있다. 최근 STR을 PCR로 증폭한 검사법에 의해 매우 민감하고 유용하게 혼합 키메라 현상을 검출할 수 있다고 보고되고 있으나, 이 방법의 민감도와 임상적 의의는 아직 완전히 정립되지는 않았다. 따라서 PCR-STR검사법이 혼합 키메라 현상을 민감하게 검출하는지 보고, 동종 골수 이식 후 혼합 키메라 현상의 변화 양상을 관찰하고, 키메라 현상의 임상적 의의를 보고자 하였다.
방법 : 형제로부터 동종 골수 이식한 급성 백혈병 6명과 만성 백혈병 2명의 모두 8명을 대상으로 하였다. 44개 골수 검체에서 phenol/chloroform방법에 의하여 단핵세포 DNA를 추출하였다. DNA는 CTT 삼중체, vWA와 amelogenin시발체를 이용하여 증폭하였다. 증폭 산물은 5% 폴리아크랄아미드 젤에서 전기영동 뒤 은 염색으로 확인하였다. 2명의 DNA를 여러 비율로 혼합하여 상기 검사를 하여 검출 가능 최소 농도를 결정하였다.
결과 : 상기 검사법의 검출 가능 최소농도는 0.25%였다. 혼합 키메라 현상은 8명중 4명에서 관찰되었다. 혼합 키메라 현상은 보인 1명에서 급성 및 만성 이식편대 숙주 질환이 나타났고, 완전 공여자 키메라 현상을 보인 1명에서 만성 이식편 대 숙주 질환이 나타났다. 점진적으로 증가하는 혼합 키메라 현상을 보인 2명은 이식 후 12개월에 질병 재발을 보였으나, 완전 공여자 키메라 현상을 보인 경우엔 재발이 관찰되지 않았다.
결론 : PCR-STR검사법은 동종 골수 이식 후 남아 있는 환자 세포를 검출하고 키메라 현상을 관찰하는데 유용한 방법이다. 또한 이 검사법은 동종 골수 이식 후 재발의 조기 진단, 이식편 대 숙주 질환의 평가와 면역 관용에 임상적으로 응용할 수 있으리라 생각한다.
Background : Chimerism analysis after allogeneic bone marrow transplantation (BMT) for leukemia could be helpful understanding of the early marrow engraftment, disease relapse, and graft rejection. Recently, a PCR technique which amplifies short tandem repeats(STR) has been reported to be highly sensitive and reliable in detecting mixed chimerism. But its sensitivity and clinical significance has not been established. The purpose of this study was firstly, to confirm whether a PCR-STR in highly sensitive enough ti assess mixed chimerism, secondly to monitor the changing patterns of mixed chimerism after allogeneic BMT, and lastly to determine correlation between the chimeric status and the clinical outcome.
Methods : A study was made eight patients (six with acute leukemia and two with chronic leukemia) who underwent unmanipulated allogeneic BMT along with matched donors. DNA was extracted from mononuclear cells of 44 bone marrow samples using a phenol/chloroform method. Amplification of DNA was done using CSFIPO-TPOX-TH01(CTT) triplex with or without vWA or amelogenin primer. The amplified product was separated on 5% polyacrylamide gel and was confirmed by silver staining. The sensitivity of CTT triplex method was determined by mixing DNA from two person in serial proportion using the same method.
Results : The sensitivity for CTT triplex method was 0.25% Mixed chimerism was documented in 4 of 8 patients. ONe of four patients with mixed chimerism developed acute and chronic graft versus host disease (GVHD) and one of four patients with complete donor chimerism also developed chronic GVHD. Two patient with progressive mixed chimerism relapsed at 12 months post-BMT, whereas no patient with complete donor chimerism has relapsed.
Conclusion : The study has found that PCR-STR was an effective method for the detecting residual host cell and monitoring the chimeric status after allogenic BMT. PCR-STR can also be clinically applicable in early prediction of relapse, appropriate assessment of GVHD, as well as tolerance after allogeneic BMT.
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