배경: C.trachomatis의 진단은 군체 배양의 어려움이 많이 있어 최근 gene probe 및 PCR등의 분자 생물학적 방법이 널리 사용되고 있다. 이에 저자들도 C.trachomatis의 MOMP를 암호 하는 gene probe "pFEN 50"을 진단에 사용하여 세포배양 결과와 비교 분석하였다.
방법: pFEN 50를 gene probe로 사용하여 표준균주 및 자궁내막염 환자 80예의 자궁경부 검체에서 C. trachomatis를 검출하기 위하여 세포배양과, 더불어 dot-blot hybridization을 실시하였다.
결과: Gene probe pFEN 50는 Bam HI으로 처리한 C.trachomatis DNA의 9.8kb 편절과 강하게 반응하였다. pFEN 50는 14종의 C.trachomatis와 반응하여 모두 양성반응을 나타내었으나 C.pneumoniae의 원인균인 TWAR 뿐만아니라 S.aureus, Coagulase negative staphylococcus, Gram positive bacilli, α-hemolytic streptococcus, β-hemolytic streptocococus, E.cloacae, A.lowffi, P. aeruginosa, E.coli, K.pneumoniae와는 일체 반응하지 않는 종특이 gene probe였다. pFEN 50의 예민도는 LGV typeⅡ의 DNA를 희석하여 실험한 결과 100pg까지 측정 가능하였다. 임상검체 80예에서 gene probe 및 세포배양에서 양성은 3명, gene probe 양성 배양음성은 3예, gene probe 음성 배양양성은 1명 그리고 모두 음성은 73명 이었다.
결론: 상기 결과로 보아 pFEN 50 gene probe를 이용한 ,Dot-blot hybridization은 C.trachomatis 진단에 유용하게 나타났다.
Background: Chlamydia trachomatis is an important cause of sexually transmitted disease. Diagnostic tests based on the recognition of DNA sequences have been developed. The DNA probe assay has been described to detect specific parts of chlamydial nucleic acids. We evaluated the gene probe( pFEN 50) encoding the MOMP of C.trachomatis for detection of trachomatis from cervical specimens of 80 patients with pelvic inflammatory disease.
Methods: Chlamydial culture was performed on cyclohexamide(2㎍/ml)-treated McCoy cell monolayer in shell vials, and the specimens were spotted onto Nytran-plus after boiling monolayer in shell vials, and the specimens were spotted onto Nytran-plus after boiling in lysing buffer(50mM Tris-HCl, pH 7.5; 1% Triton X-100; 1mM EDTA, ProteinaseK 400㎍/ml). Hybridization was then carried out.
Results: The nucleic acid(pFEN 50) was hybridized with one 9.8 kb fragment from Bam HI-cleaved C.trachomatis(L2) DNA. The sensitivity of the pREN50 was 100pg DNA. No binding of the pFEN 50 to C.pneumoniae(TWAR) and other microorganisms(Staphylococcus aureus, coagulase negative staphylococcus, Grams-positive bacilli, α-hemolytic streptococcus, β-hemolytic streptococcus, Enterobacter cloacae, Acinetobacter lwoffi, Pseudomonas aeruginosae, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae) was observed. Three were positive for chlamydial culture and dot-blot hybridization. Four of eighty cases showed inconsistent results. Three of the four cases were culture negative, gene probe positive, which might be explained as false negativity of culture. One case was culture positive and gene probe be explained as false negativity of culture. One case was culture positive and gene probe negative, which might be due to the presence of dot-blot hybridization inhibitors in sample or the absence of inclusion bodies.
Conclusion: We conclude that the dot-blot hybridization assay can be used to demonstrate the presence of C. trachomatis in many clinical specimens simultaneously.
In addition, the pFEN 50 nucleic acid is a highly sensitive and specific gene probe for the detection of all serovar of C.trachomatis in clinical specimens.
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