탈회된 상아질면에 혈소판유래성장인자-BB적용시간이 치은섬유아세포의 증식에 미치는 영향 = The Effect of PDGF-BB Application Time on the Proliferation of Human Gingival Fibroblasts Using Demineralized Dentin Surface
저자
박진우 (Department of Dentistry Graduate School, Kyungpook National University)
발행기관
학술지명
권호사항
발행연도
1996
작성언어
Korean
KDC
515.000
자료형태
학술저널
수록면
303-317(15쪽)
제공처
소장기관
섬유아세포의 이주와 증식에 중요한 역할을 하는 것으로 알려진 PDGF-BB를 이용하여 테트라사이클린으로 탈회시킨 치근면에 PDGF-BB의 다양한 적용시간에 따른 증식세포수를 측정해 봄으로써, PDGF적용시간이 섬유아세포의 증식에 미치는 효과를 알아보기 위하여 본 실험을 실시하였다.
교정치료를 목적으로 내원한 환자의 발거한 소구치를 이용하여 상아질절편을 제작하여 시편으로 사용하였다. 100mg/ml 농도의 테트라사이클린으로 5분간 탈회시킨 시편을 50ng/ml 농도의 PDGF-BB로 30초, 1분, 2분, 4분, 8분 동안 처리하고 성장인자를 적용하지 않은 시편을 대조군으로 하여 각 시편을 24well 조직 배양접시에 넣고 1 × 10 exp (5)개의 치은섬유아세포를 가진 배양액 1ml 씩을 넣어 6시간 배양한 후 새로운 배양접시로 옮기고 24, 48, 72시간동안 배양하여 각 시간대별로 0.05% trypsin/0.02% EDTA로 처리하고 세포를 분리하여 광학위상차현미경하에서 세포수를 측정하고 시편의 단위면적당 세포수를 계산하여 다음과 같은 결과를 얻었다.
세포증식률의 측정실험에서 24, 48, 72시간 공히 대조군과 비교시 PDGF-BB 적용시간의 증가에 따라 증식세포수가 증가하였으며 4분 및 8분 적용군에서 세포증식률의 현저한 증가양상을 보였다.
PDGF-BB적용군과 테트라사이클린만 처리한 대조군과 비교시 24, 48시간에서는 PDGF-BB 1분 적용군부터 세포수가 증가를 관찰할 수 있었으나 적용시간 2분까지는 그 정도가 미약하였으며 4,8분 적용군에서 24,48,72시간 모두에서 대조군과 비교시 세포수 증가가 현저한 것을 관찰할 수 있었다.
PDGF-BB 적용군사이에서는 4분 적용군이 세포증식률이 가장 높은 것으로 나타났고, 8분 적용군에서는 4분 적용군에 비해 24, 48, 72시간 모두에서 세포증식률이 감소하는 경향을 보였다.
이상의 연구를 미루어 볼 때 치은섬유아세포의 증식률에서 PDGF-BB 4분 적용군이 24, 48, 72시간 모두에서 타군과 비교시 현저한 증가를 보였으므로 탈회된 상아질을 PDGF-BB의 주적용부로 하였을때 50ng/ml농도의 PDGF-BB사용시 4분정도의 적용시간이 섬유아세포의 증식을 이루는데 있어서 가장 적절한 시간이 될 것으로 사료된다.
Platelet-derived growth factor(PDGF) is one of the polypeptide growth fators. PDGF has been reported as a biological mediator which requlates activities of wound healing process including the cell proliferation, migration and metabolism. Recent studies indicated that demineralized root surface as the primary site for growth factor application has advantages over other application method, especially due to binding capacity of growth factor for exposed matrix component of demineralized dentin surface.
The purpose of this study is to evaluate optimal application time of PDGF-BB on proliferation of human gingival fibroblasts using demineralized dentin surface as primary application site.
Human gingival fibroblasts and dentin slabs were prepared from the first premolar tooth extracted for the orthodontic treatment, cells were cultured in DMEM/10% FBS at the 37℃, 5% CO_2 incubator.
All of the dentin slabs were preconditioned with Tetracycline HCl(100mg/ml) solution and rinsed in PBS.
In the cell proliferation experiment, experimental group was immersed in DMEM containing 10% FBS, 50ng/ml PDGF-BB during different time(30sec, 1, 2, 4, 8 minutes) and dried.
Cells at concentration of 1 × 10 exp (5) cells/ml were seeded in each culture well which contained dentin slabs and incubated for 6 hours. Then, all of the dentin slabs were moved into new 24 well culture dish and incubated for 24, 48, 72 hours. The cell counting was done by hemocytometer with inverted phase contrast microscope after trypsinization.
The results were as follows:
The application of PDGF-BB for 1, 2 min slightyly increased the number of gingival fibroblasts, and the application of PDGF-BB for 4, 8 min prominetly increased the number of gingival fibroblasts. The application of PDGF-BB for 4 min showed maximum proliferation rate of gingval fibroblasts at 24, 48, 72 hours, and the application of PDGF-BB for 8 min showed less proliferation rate of gingival fibroblasts compared to the application of PDGF-BB for 4 min at 24, 48, 72 hours.
In conclusion, the application of PDGF-BB for 4 min appeared to be optimal to obtain maximum proliferation of gingival fibroblasts using demineralized dentin surface as primary applicaton site of PDGF-BB.
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