B형 간염바이러스 항원 preS 및 S부위가 포함된 동물세포 발현벡터의 제작 = HBsAg;preS;S;expression vecror
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학술지명
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발행연도
2007
작성언어
Korean
주제어
KDC
521
자료형태
학술저널
수록면
19-25(7쪽)
제공처
현재까지 혈장유래 백신이나 재 조합 DNA 기술을 이용한 백신이 HBV 감염을 우수하게 억제하였음에도 불구하고, 성 관련 질병이나 마약중독 환자의 경우 낮은 면역력을 나타내며, HLA haplotype 유전자의 이상으로 인하여 T 세포 면역 반응이 활성화 되지 않는 환자들에게는 제한적인 면역능이 확인되고 있다.
이와 같은 문제점을 해결하기 위하여 기존에 사용하던 S 항원에 Pre S1이나 Pre S2 항원을 첨가하는 새로운 백신 개발에 많은 연구가 진행되고 있다.
Pre S2 항원은 HBV 비리온의 표면에 존재하는 표면 단백질이며(Heermann 등, 1984) human serum albumin과 결합 한 후(Krone 등, 1990) 간세포의 표면에 존재하는 human serum albumin receptor를 통하여 HBV를 간세포에 결합시키는 역할을 한다(Pontisso 등, 1989). 또한 pre S2 항원은 현재 S 항원 a 결정자의 HBV의 subtype 별 아미노산 차이에 의한 B 세포 관련 면역성 차이를 극복할 수 있어 heterologous strain의 감염에 따른 비 면역성의 문제를 극복 할 수 있다. 이와 같은 pre S2 항원의 특징을 근거로 하여 본 연구에서는 pre S2와 S 항원을 백신으로 사용하고자 발현벡터인 pIEspHBVS2-dhfr을 제작하였다.
일반적으로 포유동물 세포주에서 고 농도의 단백질을 발현시키기 위한 방법으로 2가지 구별된 벡터를 사용한다. 그 중 하나는 cytotoxic drug인 methotrexate(MTX)와 반응하여 유전자가 증폭되는 dihydrofolate reductase 유전자(dhfr)을 포함하는 발현 벡터를 사용하는 것이며, 다른 하나는 chromatin structure을 조절하는 요소인 matrix attachment regions(MARs)와 scaffold attachment regions(SAR)을 사용하여 높은 transcriptional 활성을 나타내는 유전적 환경을 제공함으로써 유전자 발현을 증가시키는 벡터를 사용하는 것이다(Raju 등, 2001).
또한 포유동물세포에서 외래 유전자 발현의 최대화는 프로모터의 세기와 연관이 있음으로, 우수한 프로모터를 사용하는 것이 가장 필수적이다. 이런 이유로 본 연구에서는 HBsAg유전자 증폭을 위하여 dihydrofolate reductase 유전자(dhfr)와 다양한 포유동물세포에서 강력한 프로모터로 알려져 있는 HCMV immediate-early enhancer promotor를 사용하였다(Kim 등, 2002).
따라서 본 연구에서 제작된 발현벡터인 pIEspHBVS2-dhfr은 dhfr 유전자가 발현시키고자 하는 HBsAg 유전자와 동일한 벡터 내에 존재함으로 이 벡터를 포유동물세포주인 CHO 세포에 형질 전환 시 동시에 CHO 세포 내로 도입되고 또한 염색체 DNA상의 동일 위치에 삽입되게 되어 동시 발현함에 따라 dhfr 선별배지에서 선별된 dhfr 양성 세포주들 모두는 고농도의 HBsAg 단백질을 발현할 것으로 사료된다.
A new mammalian cell expression vector for HBsAg, preS and S, was constructed using HCMV imediate early enhancer promoter. In order to develop vaccines against HBV, 10 different plasmids expressing various regions of hepatitis B surface antigen (HBsAg) were constructed. In order to amplify the HBsAg expression, we inserted dihydrofolate reductase (dhfr) gene into the plasmid containing nucleotide 2878 to 846 of HBV genome (pIEsp2878-dhfr).
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