SCIE
SCOPUS
KCI등재
Dictyostelium discoideum Ax2 as an Assay System for Screening of Pharmacological Chaperones for Phenylketonuria Mutations
저자
Kim, Yu-Min ; Yang, Yun Gyeong ; Kim, Hye-Lim ; Park, Young Shik
발행기관
학술지명
Journal of microbiology and biotechnology(Journal of Microbiology and Biotechnology)
권호사항
발행연도
2015
작성언어
English
주제어
등재정보
SCIE,SCOPUS,KCI등재
자료형태
학술저널
수록면
782-787(6쪽)
DOI식별코드
제공처
In this study, we developed an assay system for missense mutations in human phenylalanine hydroxylases (hPAHs). To demonstrate the reliability of the system, eight mutant proteins (F39L, K42I, L48S, I65T, R252Q, L255V, S349L, and R408W) were expressed in a mutant strain (pah<sup>-</sup>) of Dictyostelium discoideum Ax2 disrupted in the indigenous gene encoding PAH. The transformed pah - cells grown in FM minimal medium were measured for growth rate and PAH activity to reveal a positive correlation between them. The protein level of hPAH was also determined by western blotting to show the impact of each mutation on protein stability and catalytic activity. The result was highly compatible with the previous ones obtained from other expression systems, suggesting that Dictyostelium is a dependable alternative to other expression systems. Furthermore, we found that both the protein level and activity of S349L and R408W, which were impaired severely in protein stability, were rescued in HL5 nutrient medium. Although the responsible component(s) remains unidentified, this unexpected finding showed an important advantage of our expression system for studying unstable proteins. As an economic and stable cell-based expression system, our development will contribute to mass-screening of pharmacological chaperones for missense PAH mutations as well as to the in-depth characterization of individual mutations.
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