Vector Constructions for the Identification of Vacuole Targeting Signal = 액포지향 정보의 색출을 위한 벡터 조작
저자
Lee, Woo-Sung (성균관대학교 생물학과)
발행기관
학술지명
권호사항
발행연도
1994
작성언어
English
KDC
472.000
자료형태
학술저널
수록면
9-19(11쪽)
제공처
소장기관
Phaseolus vulgaris의 종자저장 단백질인 phaseolin의 polypetide 서열내에서 액포지향을 결정하는 서열을 밝혀내고자 한다. 이 단백질이 액포로 운반되는 것을 쉽게 검색하기 위해 phaseolin의 다양한 부위들을 β-glucuronidas (GUS) reporter 유전자를 융합시켜, 이 융합 단백질이 phaseolin의 조절부위의 영향에 의해 조절되도록 하였다. 이와 같은 phaseolin/GUS 융합유전자를 만들기 위해 6개의 BamHI site와 1개의 BglⅡ site를 phaseolin coding 부위에 site-directed mutagenesis를 이용하여 도입시켰다. 이로 인해 phaseolin의 아미노 말단쪽이 아미노산 잔기가 0, 1, 30, 35, 50, 104, 416 개 포함된 7가지의 phaseolin/GUS 융합단백질이 만들어 졌다. 이 융합유전자를 Agrobacterium tumefacience Ti plasmid-drived vector를 이용하여 Nicotiana tabacum L. cv. Xanthi(담배)에 도입시켰다. 이 융합단백질의 액포운반 효율은 transgenic 식물의 종자에서 GUS활성과 immunodetection을 통해 확인될 것이다.
We were interested in identifying the vacuole transport signal within the polypetide sequence of phaseolin, a seed storage protein from the common bean, Phaseolus vulgaris. In order to facilitate assaying for protein transport into vacuole, varying parts of the phaseolin coding sequence was translationally fused to the β-glucuronidase (GUS) reporter gene and the fusion genes were expressed under the control of phaseolin 5'-upstream sequence. To construct phaseolin/GUS fusion genes, six BamHI sites and one BglII site were introduced into seven locations of the phasolin coding sequence using site-directed mutagenesis. This produced seven phaseolin/GUS fusion genes in which the N-terminal 0, 1, 30, 35, 50, 104 and 416 amino acids of the phaseolin β-polypetide were fused to the GUS gene. The fusion genes were transferred to Nicotiana tabacum L. cv. Xanthi using an Agrobacterium tumefaciens Ti plasmid-drived vector. The vacuole transport efficiency of these fusion proteins will be assessed using GUS activity and immunodetection in seeds of transgenic tabacco plants.
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