연구배경: HLA-DP 유전자는 DR 및 DQ와 같이 항원제공 세포(APCs), B 세포 및 활성화된 T 세포등의 표면에 발현되는 class Ⅱ 유전자로서 외인성 항원제공시 MHC 제한(restriction)과정을 통해 면역 반응에 관여한다. DP 항원 분자는 PLT(primed lymphocyte test)와 같은 세포학적 방법에 의해 처음으로 규명되었고, 이어서 혈청학적 형별이 시도되었으나, DR, DQ 분자에 비해 발현 정도가 낮아 형별에 어려움이 있었다. 최근 DP 유전자의 염기서열이 밝혀짐에 따라 DNA 수준에서 DP 형별이 가능하게 되었으며, 지금까지 DPA1 10개, DPBI 77개의 대립유전자가 밝혀졌다. 본 연구는 이식의 결과 및 질병 발생과 연관이 있다고 추정되는 HLA-DPB1 대립유전자를 DNA 수준에서 형별하고 정상 한국인의 DP 대립유전자 분포를 확인하기 위해 시도되었다.
방법: HLA-DPB1 유전자 중 초가변부위(hypervari-able region)가 있는 exon 2 부위를 일차적으로 증폭시킨후, 17종의 probe를 사용하여 PCR-SSOP를 실시하였고, PCR-SSP에는 5종의 primer를 사용하였다. 이들 방법은 DP형이 알려진 미국 UCLA 대학의 international cell exchange sample 88개를 표준 DNA 시료로 이용하여 확립하였다.
결과: 36종류의 HLA-DPBI 대립유전자를 형별할수 있음을 확인하였다. 그러나 DPBI*0402와 0601 대립유전자를 동시에 갖는 heterozygote인 경우에는 DPBI*0201와 2001을 동시에 갖는 heterozygous와 구분이 어려웠다. 100명의 정상 한국인에서 DPBI 대립 유전자형의 분포를 조사한 결과 한국인에서는 11종류의 HLA-DP 대립유전자가 존재함을 확인하였고, DPBI*0501(36.5%), 0201(27%), 0402(10.5%) 대립유전자의 순으로 분포되어 있었으며 검출율은 100%였다.
결론: 이상의결과로 골수 이식 등 이식시 공여자와 수혜자간의 조직적합성은 HLA-DP, DQ뿐만 아니라 DP도 확인 하게되었으며, 앞으로 질병과의 연관성 연구에서 이용될수 있을것으로 사료된다.
Background: The HLA-DP genes are highly polymorphic, which encode heterodimeric cell surface glycoproteins that play a role in the immune response as restriction elements in antigen presentation. HLA-DP antigens were initially defined through the primed lymphocyte test (PLT), and the serological typing has been performed which is practically difficult because the expression of DP molecules is very low, comparing with that of DR and DQ. Recently, DNA sequencing and PCR have allowed the various and extensive study on the HLA-DP genes. We developed the molecular typing method for HLA-DPBI alleles, and studied the distribution in normal Korean population.
Methods: After PCR amplification of hypervariable exon 2 regions in HLA-DPBI gene, both PCR-SSOP (sequence specific oligonucleotide probes) with 17 probes and PCR-SSP (sequence specific primers) by 5 Primers were used. And this method was tested using a international pannel DNA as standard.
Results: Total 36 alleles of HLA-DPBI were defined in the standard DNA pannel. However, DPBI*0.402, and 0601 heterozygote could not be distinguished from DPBI*0201 and 2001 heterozygote. And 11 alleles were defined in 100 normal Koreans and the common alleles were DPBI*0501 (36.5%). 0201 (27%) and 0402 (10.5%). The detection rate was 100% in this study.
Conclusion: As the results, the molecular typing of HLA-DPBI alleles is possible for the accurate matching between donor and recipient in born marrow transplantation and for the study of disease association.
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