Trehalose와 EDTA를 이용한 돼지정액 동결과 동결정액내 Reactive Oxygen Species 수준에 관한 연구

국문 초록 (Abstract)

본 연구는 동결과정중 trehalose 또는 trehalose와 EDTA의 혼합첨가가 돼지정액의 동결보호기능에 미치는 영향을 조사하기 위하여 시도되었으며 그리고 trehalose와 EDTA의 첨가가 정자내 활성산소계(ROS)에 어느정도 영향하는지를 조사하였다. 이들 첨가에 따른 동결보호능력을 비교하기 위한 parameter로서 정자의 CASA 운동양상, 생존성, 첨체온전성, 저삼투성팽창화를 냉각후와 동결융해후에 조사하였다.

1. 냉각후 정자활력은 0.025-0.05M trehalose 첨가보존액에서 다소 높았으나 trehalose 첨가농도간에 유의성은 없었다. 동결융해의 활력은 0.05M trehalose첨가가 대조구와 0.1-0.2M첨가구보다 유의적으로 높았으며 냉각과 융해후 CASA의 정자운동양상은 trehalose 농도간에 차이가 없었다.

2. 0.05-0.1M trehalose와 2-5mM EDTA의 혼합첨가에서 냉각후 정자활력이 trehalose 단독첨가보다 약간 높았으나 유의성은 없었다. 융해후 활력은 0.1M trehalose와 2mM EDTA 혼합이 trehalose 단독보다 유의적으로 높았다. 동결정자의 VCL, VAP와 LIN은 trehalose와 EDTA 혼합첨가에서 trehalose 단독보다 높았으나 유의성은 없었다.

3. Trehalose 단독첨가의 냉각후 정자 생존성은 대조구와 차이가 없었으나 동결융해후 생존성은 0.05-0.1M trehalose에서 다른 농도보다 유의적으로 높았다. 동결융해후의 높은 생존성은 0.1M trehalose, 5mM EDTA 혼합첨가에서 얻어졌다.

4. 냉각 및 동결융해후의 첨체온전성은 0.05-0.1M trehalose 단독에서 유의적으로 높았고, 융해후 첨체온전성은 0.1M trehalose , 2-5mM EDTA 혼합에서 trehalose 단독보다 유의적으로 높았다.

5. 저삼투압 팽창정자의 비율은 냉각후에서 trehalose 첨가구가 대조구와 차이가 없었고 혼합첨가와 단독첨가간에도 차이가 없었다. 그러나 융해후에는 0.05-0.1M trehalose, 5mM EDTA 혼합첨가때 trehalose 단독보다 월등히 높았다.

6. Trehalose 첨가정자내 ROS 수준은 EDTA 첨가에서보다 냉각후 7% 및 동결융해후 20% 더 낮은 경향이 있었다. 0.1M trehalose와 5mM EDTA 첨가정자에서의 ROS는 다른 첨가구보다 대체로 높았다.

결론적으로 trehalose의 동결시 세포막보호효과는 0.05-0.1M 첨가수준에서 돼지정액의 동결보존을 향상시킬 수 있었으며 또한 trehalose와 EDTA 혼합 효과가 비록 크지는 않았으나 관찰되었다.

목차 (Table of Contents)

• I. 서 론 8
• II. 연 구 사 10
• III. 재료 및 방법 15
• 1. 공시정액 15
• 2. 돼지 동결정액의 제조 및 융해 15
• 1) 동결보존액의 제조 15
• 2) Trehalose와 EDTA의 첨가 15
• 3) Washing media의 제조 16
• 4) 동결정액의 제조 및 융해 16
• 3. 정액성상 및 정자기능 검사 방법 16
• 1) 정액의 처리 16
• 2) 정자의 운동성 검사(Computer assisted sperm analysis CASA) 16
• 3) 정자의 원형질막 검사(Hypo-Osmotic Swelling Test HOST) 17
• 4) 정자 첨체검사 19
• 5) 정자의 생존율 20
• 4. ROS의 측정 20
• 5. 통계분석 21
• IV. 결과 및 고찰 22
• 1. Trehalose 첨가의 효과 22
• 1) 정자활력과 운동양상 22
• 2) 정자생존율과 첨체정상율 22
• 3) 정자의 HOST 23
• 2. Trehalose와 EDTA 첨가의 효과 29
• 1) 정자활력과 운동양상 29
• 2) 정자생존율과 첨체정상율 29
• 3) 정자의 HOST 30
• 3. 활성산소계(ROS) 수준 31
• V. 참고문헌 40
• VI. 국문초록 51
• VII. ABSTRACT 53