KCI등재
DIS80의 遺傳子型 決定을 위한 PCR法의 條件에 관한 硏究 = Valid Conditions on the Analysis of the DIS80 Locus using PCR
The polymerase chain reaction(PCR) is known to be a very sensitive method of nucleic acid synthesis by which a particular segment of deoxyribonucleic acid(DNA) can be specifically amplified. However, as no single protocol will be appropriate to all situations, it requires to optimize the PCR conditions for a given application, especially analytical procedure to amplified fragment length polymorphism of VNTR region. Recently, typing of VNTR regions in the field of forensic science is almost done by PCR, but this reaction ofter results in a number of potential problems including generation of recombinant alleles during the extension phase.
The objective of this paper is to evaluate the cause of PCR products of a abnormal length, and to set up the guideline for the reliable production of D1S80VNTR region in the human genome by studying several parameters that influence polymerase chain reaction.
In the study of D1S80 VNTR region to be amplified, the following PCR conditions are optimal in the 50㎕ of reaction volume and under the temperature conditions of 95℃ for 1 minute, 65℃ for 2 minutes and 72℃ for 2 minutes.
1. The adequate concentration of MgCl₂ is within the range of 1.0 to 2.0 mM.
2. The high activities of Taq polymerase show about 0.5 to 1.5 units without generation of the undesired products.
3. The adequate amount of template DNA is about 30 to 50ng, although the template DNA can be amplified with the minimum of 40pg.
4. With the 50ng of template DNA, the adequate numbers of PCR cycle range 25 to 27 cycles.
5. Artifact production by PCR is minimal within the range of 0.2 to 0.3μM of each primer concentration. With the above conditions, amplified fragment length polymorphism (AMP FLP) obtained by polymerase chain reaction from the genomic DNAs of 4 Korean families (one family with 8 offsprings and both parents, 3 families composed of each one child and both parents) were analyzed to test the applicability of this technique to paternity testing. The results obtained present reliable parent child relationships based on the correct genotypes of D1S80, without any undesired PCR products of abnormal length that are postulated as heteroduplex resulting from cross annealing or hybridization between the amplified target DNA.
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