심부전 선별검사를 위한 혈청 중 N-terminal pro B-type Natriuretic Peptide 검출 방법의 개발
저자
발행사항
서울: 단국대학교, 2005
학위논문사항
학위논문(석사)-- 단국대학교 대학원: 분자생물학과 분자생물학전공 2005
발행연도
2005
작성언어
한국어
주제어
DDC
574.29 판사항(20)
발행국(도시)
서울
기타서명
Development of detection method of N-terminal pro B-type Natriuretic Peptide in human serum for the screening of heart failure
형태사항
v,49 장: 삽도; 26cm.
일반주기명
소장기관
Brain natriuretic peptide (BNP) is a cardiac hormone responsible for numerous physiological conditions such as natriuresis and vasodilation. Since BNP and N-terminal proBNP (NT-proBNP) are excellent markers for heart failure or hypervolemia, we hope to develop the diagnostic tools for heart failure by specifically detecting these proteins in serum. We expressed recombinant human proBNP and NT-proBNP that were composed of 108 and 76 aa, respectively. GST-tag or His-tagged recombinant proteins were produced for each protein and used as immunogens. Monoclonal antibodies (mAbs) against human NT-proBNP were produced and six hybridoma cell lines were established for the NT-proBNP. Epitope mapping analysis suggested that all of five mAbs recognized N-terminal portion of human proBNP as shown by ELISA method. To characterize the specificity of the monoclonal antibodies, western blotting was performed with five mAbs and found that all of the mAbs recognized a protein band of 10 kDa of recombinant NT-proBNP. These monoclonal antibodies for NT-proBNP utilized to design the ELISA based diagnostic kit for NT-proBNP related diseases, such as Congestive Heart Failure and Myocardiac Infarction.
더보기뇌 나트륨이뇨성 펩티드 (Brain Natriuretic Peptide: BNP)는 심장성 호르몬의 일종으로서 체내의 표적기관에 작용하여 나트륨배설 및 혈관확장 등의 생리적 반응을 유도하는 역할을 한다. 호르몬의 전구체인 proBNP는 심근세포에서 108개의 아미노산 서열로 합성되며 혈중으로 분비된 후에는 32개의 아미노산으로 이루어진 활성형 분자 형태인 BNP와 생리적인 기능이 알려지지 않은 76개의 비활성형 N-terminal proBNP (NT-proBNP) 단편으로 분절화 된다. BNP와 NT-proBNP는 모두 심부전 등의 심장질환 및 과다혈증 등 체액의 부피 증가를 유발하는 질환의 진단, 치료 및 예후 관찰에 사용 할 수 있는 우수한 생체 표지자로서 임상적인 활용도가 지속적으로 증가하고 있다. 본 연구는 혈중 NT-proBNP 검출 방법을 개발하고자 목적 하였으며 보다 궁극적으로는 심부전 발병 위험을 사전에 진단할 수 있는 혈액 스크리닝 검사법을 제공하고자 하였다. 검출 방법을 개발하기 위한 원료물질인 monoclonal antibodies를 개발하기 위해 유전자 재조합 기법을 이용하여 GST-fusion 형태의 proBNP1-108, NT-proBNP1-76 및 BNP77-108 단백질 및 histidine-tag으로 표지한 proBNP1-108 와 NT-proBNP1-76 단백질 발현용 균주를 제작하였다. 유전자 재조합 균주로부터 배양, 발현 및 정제과정을 거쳐 정제 단백질을 수득하고 면역원으로 사용하였다. 면역화된 Balb/c mouse로부터 NT-proBNP에 특이적으로 결합하는 5종의 monoclonal antibody 생산용 융합세포주를 얻었다. 단일 클론 항체의 subtype은 ELISA 기법을 이용하여 동정 하였으며 western blot, antibody capture assay 및 steric inhibition mapping 시험을 수행하여 항원에 대한 각 항체의 결합 특이성을 확인하였다. 상기의 신규한 단일 클론 항체의 조합을 평가하여 검출기법에 사용할 수 있는 항체-쌍을 결정하고 혈중 NT-proBNP를 검출할 수 있는 효소면역형광측정법(Enzyme Linked Fluorescent Assay)을 확립하였다
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