Effect of the Chelating Agents on the Phosphorylated Form of RNA Polymerase Ⅱ during Purification = 인산화된 RNA Polymerase Ⅱ 정제 과정 중의 Chelating Agents의 효과
저자
Dahmus, Michael E. (Department of Biochemistry and Biophysics, University of California) ; Kim, Woo-Yeon (Department of Biotechnology, chung-Ang University)
발행기관
中央大學校 遺傳工學硏究所(Institute of Genetic Engineering Chung-Ang University)
학술지명
권호사항
발행연도
1994
작성언어
English
주제어
KDC
476.1
자료형태
학술저널
수록면
33-39(7쪽)
제공처
소장기관
인산화된 calf thymus RNA polymeraseⅡ는 높은 농도의 chelating agent를 사용하여 정제될 수 있다. 본 연구의 목적은 높은 농도의 chelating agent가 calf thymus DNA를 이용한 비선택적 역가에 미치는 영향을 조사함에 있다. Calf thymus 핵 추출물의 4℃와 37℃에서의 변화를 protein blotting으로 조사한 결과, RNA polymerase Ⅱ0는 단백질 분해효소 저해제들에 의해 약간 안정화되었으며 20 mM EDTA와 10 mM EGTA 존재하에서는 4℃에서 43시간까지 변화하지 않았다. 높은 농도의 chelating agent 존재하에 Phenyl-Superose와 Mono Q에서 분리정제된 RNA polymerase ⅡO의 Mg²+과 Mn²+의 최적농도를 조사한 결과 0.1 mM EDTA 존재하에 정제된 RNA polymerase Ⅱ와 큰 차이가 없었다.
The phosphorylated form of RNA polymerase Ⅱ could be purified from calf thymus using the buffer containing high concentrations of chelating agents. The objective of this study was to investigate the effect of high concentrations of chelating agents on the enzyme activity in nonselective assay using calf thymus DNA as DNA template. Calf thymus nuclear extracts were aged at either 4℃ of 37℃ and the stability of RNA polymerase ⅡO determined by protein blotting. RNA polymerase ⅡO was partially stabilized by the inclusion of protease inhibitors and stable for 43 hr at 4℃ in the presence of 20 mM EDTA and 10 mM EGTA. RNA polymerase ⅡO separated on Phenyl-Superose and Mono Q in the presence of buffer containing 20 mM EDTA and 10 mM EGTA dose not change appreciably the optimal concentration range for Mg²+ and Mn²+ compared to the RNA polymerase Ⅱ purified in the presence of 0.1 mM EDTA.
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