결명자로부터 지방 분해효소 활성 억제제의 추출 및 그 특성에 관한 연구

국문 초록 (Abstract)

최근 우리나라에서는 서구화된 식생활이 유입됨에 따라 지방의 섭취가 증가하고 있으며 그와 관련한 동맥경화, 당뇨병 등 성인병의 발생비율도 함께 증가하고 있다. 이에 비만을 방지하기 위한 약물의 연구가 활발하게 진행되고 있으며 본 연구에서는 지방분해효소 흡수 메커니즘을 이용한 지방분해 효소 활성 억제제를 찾기 위해 천연물인 결명자를 대상물질로 삼고 실험을 실시하였다. 효소로는 돼지 췌장 lipase를 이용하였고 기질로 올리브오일을 이용 효소반응 실험을 실시하여 그 성능을 비교하였다. 결명자로부터 효소활성저해물질을 추출하기 위한 최적 추출용매 선정 실험을 실시하였고 결명자 추출물의 온도 안정성 및 pH 안정성을 확인하였다. 결명자 추출물로부터 효소활성저해물질을 분리 정제하기 위해 컬럼 크로마토그래피와 용매추출을 이용하였다. Lineweaver- Burk plot을 이용 결명자 추출물의 활성저해 type과 Michaelis-Menten 상수를 확인하였다. 그 결과 결명자추출물로부터 최대 70%의 효소활성저해 효과를 확인 할 수 있었다. 최적 추출용매로는 99% 에탄올을 이용하였고, 80℃이상에서 약 70%의 안정성을 가지며 낮은 pH에서는 약 50%의 활성도 감소를 보였다. 활성저해 type은 비경쟁반응이며 속도 상수는 약 7×10^(5) mg/L으로 나타났다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

Recently western diet has become popular worldwide and even Korean also likes to follow that trend. Such western foods tend to contain excessively high fats than we used to consume in everyday life. So, increasing number of people suffer from the obesity-related sickness like dyslipidemia, diabetes and so forth. And to prevent those illness many researchers have actively developed new medicines. In this study, optimal condition of obtaining lipase inhibitor from natural Cassia tora Linne has been investigated. To test the activities of the enzyme, hydrolysis rates of olive oil(substrate) catalyzed by pancreatic lipase with the inhibitors obtained under various conditions have been compared. First the solvent to extract the lipase inhibitor from Cassia tora Linne has been selected from the results of those tests. Subsequently, the thermal and acidic stabilities of our target material have been proved. By virtue of column chromatographic method, lipase inhibitor have been separated from the extracts of Cassia tora Linne. The inhibition type of Cassia tora Linne with its Michaelis-Menten constant has been proved by using Lineweaver-Burk plot. I can conclude that the maximum inhibition percent of extract from Cassia tora Linne is currently 70%. Also the best solvent of the extraction is 99 proof ethyl alcohol over 80℃ showing 70% activity. In low pH, the activity has been reduced by half. Finally, the type of inhibition reaction is turned out to be non-competitive with the Michaelis-Menten constant of about 7×10^(5)mg/L.

목차 (Table of Contents)

• 1. 서론 = 1
• 2. 이론적 고찰 = 4
• 2.1 비만의 약물요법 = 4
• 2.2 Lipase 활성저해제 (Lipase inhibitor) = 6
• 2.3 효소 반응속도론 = 9
• 2.4 결명자(Cassia tora Linne) = 15
• 3. 실험 = 16
• 3.1 실험 재료 = 16
• 3.2 실험 방법 = 17
• 3.2.1 효소반응 = 17
• 3.2.2 효소의 활성도 측정방법 = 18
• 3.2.3 추출방법 = 20
• 3.2.4 지방산의 정성분석 방법 = 20
• 3.2.5 지방산의 정량분석 및 산가측정 = 23
• 3.2.6 지방산의 정량분석 및 비색정량법 = 24
• 3.2.7 온도 및 pH안정성 측정 = 26
• 3.2.8 Kinetics of inhibition activity = 26
• 3.2.9 분리 및 정제 = 27
• 4. 결과 및 고찰 = 29
• 4.1 최적 반응 기질 농도 및 효소량 선정 = 29
• 4.2 추출 용매 선정 = 33
• 4.3 온도 및 pH안정성 = 36
• 4.4 Kinetics of inhibitory activity = 39
• 4.5 결명자 추출물의 분리 및 정제 = 41
• 5. 결론 = 46
• 참고 문헌 = 48
• Abstract = 51