노봉방(Vespae Nidus)이 skin cell line의 열자극 손상에 미치는 영향 = Effects of Vespae Nidus extracts on HaCaT cells.
저자
발행사항
전주: 전북대학교 교육대학원, 2008
학위논문사항
학위논문(석사)-- 전북대학교 교육대학원 교육대학원: 교육학(생물교육) 2008. 8
발행연도
2008
작성언어
한국어
주제어
DDC
570
발행국(도시)
전북특별자치도
기타서명
Effects of Vespae Nidus extracts on HaCaT cells
형태사항
v, 26 p: 삽도; 26 cm.
일반주기명
소장기관
피부 표피세포가 태양광선에 장시간 노출되면 세포질이 수축되거나 핵이 조각나는 등 의 세포에 심각한 손상을 초래하게 된다. 이러한 세포의 변화는 세포사멸의 특징적인 형태에 부합되며 광선의 유해한 자극에 세포가 세포사멸의 신호전달을 개시한다는 것을 의미한다.
본 연구의 목적은 항산화제제로 알려진 노봉방(Vespae Nidus)이 온도에 의해 자극 받은 각질형성세포인 HaCaT세포의 세포사멸에 어떠한 효과를 나타내는지를 알아보고자 하였다. 이를 위하여 배양세포를 자극온도 (70 ℃)에 노출한 후 실험군에 노봉방을 처리하여 세포활성도 측정(MTT assay), DAPI 염색, TUNEL(terminal deoxynucleotidyl transferase mediated biotin-dUTP nick-end labeling) 염색, 웨스턴 분석, 그리고 반응성 산소종(ROS) 생성 측정 등의 세포생존과 사멸에 관련된 세포생물학적 기법으로 세포의 변화를 추적하였다.
70 ℃ 온도자극에서 43%로 감소되었던 세포생존률은 노봉방 처리(50ug/ml)시 81%로 증가하였으며 노봉방 전처리 군에서 핵의 응축과 절편현상이 현저하게 감소함을 관찰할 수 있었다. 대조군에서는 관찰되는 TUNEL 양성세포들이 노봉방을 처리한 실험군에서는 감소되는 것을 관찰할 수 있었다. 또한 PARP 항체에 의한 웨스턴 분석에서는 대조군에서는 케스페아제-3에 의해 PARP(116kDa)의 절단된 형태(85kDa)가 증가하여 세포사멸이 진행됨을 보여 주었지만 노봉방이 처리된 실험군에서는 85kDa-절단된 PARP가 감소하고 있는 것이 관찰되었다. 반응성 산소종(ROS) 제거제인 노봉방을 처리한 세포에서 온도자극에 의한 ROS 발생도 온도자극만 가해준 대조군에 비해 감소하였다.
이상의 실험결과에서 온도자극을 각질형성세포인 HaCaT세포에 주었을 때 반응성 산소종이 세포고사 현상을 유발하며 항산화제인 노봉방은 피부세포인 HaCaT 세포고사를 억제하는데 관여하는 것을 알 수 있다.
The skin cell would get seriously damaged such as cytoplasmic contraction or nuclear fragmentation if it is exposed to sun light for long time. These cellular changes reflects that the cell undergoes apoptosis and unfriendly stimulant get the cell to initiate the response of signal transduction for programmed cell death.
The objective of this study is to learn how Vespae Nidus, a well-known anti-oxidant, affects on apoptosis of HaCaT cell irritated by heat. In order to achieve this purpose, the cultured skin cell line were exposed to stimulant(70 ℃), subjected to anti-oxidant solution, and then compared to heat-exposed control cell line by apoptosis-related cell biology techniques, such as MTT assay, DAPI staining, TUNEL(terminal deoxynucleotidyl transferase mediated biotin-dUTP nick-end labeling) staining, western blot analysis, and ROS measurement.
While the cell viability was reduced to 43% when cell was exposed at 70 ℃, it was recovered to 81% when cell was subjected to Vespae Nidus at same condition. And the experimental cell line treated with anti-oxidant was observed to have a large reduction of condensation and fragmentation of nucleus. The many of TUNEL-positve cells were observed in control cell line but their numbers were much less in the experimental group of anti-oxidant. In western blot analysis by anti-PARP antibody, the control cell line showed a the significant increase of PARP cleavage proteased by caspase-3, indicating that the cells were undergoing apoptosis, but the experimental group contained less amount of trucated PPAR form. In addition, it was also observed the decrease in ROS generation in respond to heating stimulation via the treatment of Vespae Nidus which roles as a ROS scavenger.
These results suggest that ROS is related with the apoptosis in relation to the cell death which occurred when the keratinocyte HaCaT cells are stimulated by heat, and Vespae Nidus, the antioxidant, is effective in regulating the apoptosis of HaCaT cells.
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