Streptomyces exfoliatus로부터 얻어진 제한효소의 분리정제 및 성질에 관한 연구 = Purification and Characterization of a Restriction Endonuclease from Streptomyces exfoliatus
30가지의 방선균 균주를 대상으로 제한효소를 탐색하였는데, 이 중 한 균주 (Streptomyces exfoliatus)로부터 제한효소의 활성을 발견하여 이로부터 제한효소 sexⅢ를 분리제정하고 그 특성을 조사하였다. 제한효소의 정제는 streptomycine sulfate 침전, DEAE-cellulose, hydroxylapatite, phosphocellose PⅡ column chromatography에 의해 행해졌고, SDS-polyacrylamide gel electrophoresis에 의해 소단위체의 분자량이 56,000 dalton으로 추정되었다. 이 효소는 lambda DNA를 네 군데, pBluescript를 한 군데 자른다. 활성은 넓은 범위의 pH에서 안정되었고 75mM이상의 염에 의해서 저해된다. 활성을 위해 고농도(20-40 mM)의 MgCl_2가 요구되며 다른 효소들과 달리 낮은 농도의 MgCl_2에서는 부분절단이 일어나는 것이 특징이었다. Lambda DNA를 이용하여 제한효소의 지도를 작성한 결과 인식서열이 5'-CCGC/GG-3'으로 밝혀졌으므로 이 sexⅢ는 saeⅡ의 isoschizomer임이 확인되었다.
더보기Thirty strains of Streptomyces sp.isolated from soil samples were screened for the presence of site-specific endonuclease. One strain among them showed endonuclease activity to cleave lambda DNA. This study describes the purification and characterization of a site-specific restriction endonuclease SexⅢ from Streptomyces exfoliatus. The purification procedure includes streptomycin sulfate treatment, DEAE-cellulose, hydroxylapatite, phosphocellulose PⅡ column chromatography. This enzyme required high Mg^2+ concentration (20-40 mM). and showd maximal activity at neutral ph(7-8) in the absence of NaCl. The enzyme did not require salt for its activity and was inhibited by over 75mM NaCl. SexⅢ cut lambda DNA and plasmid pBluescript, recognized the hexanucleotide sequence 5'-CCGC/GG-3', and proved to be an isoschizomer of SacⅡ.
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