아데노 바이러스를 이용한 Telomerase-Antisense 발현이 인간 배아 줄기세포로부터 조혈모세포로의 체외 배양 시 세포 증식 및 Apoptosis에 미치는 영향 = The Effect of Adenovirus-Mediated Telomerase Antisense Expression on Cellular Proliferation and Apoptosis of the in-vitro Culture from Human Embryonic Stem Cells to Hematopoietic Stem Cells
저자
김병수 (고려대학교 의과대학 내과학교실, 줄기세포연구소) ; 유지현 (고려대학교 의과대학 줄기세포연구소) ; 송준석 (고려대학교 의과대학 생명공학연구소) ; 오상철 (고려대학교 의과대학 내과학교실) ; 서재홍 (고려대학교 의과대학 내과학교실) ; 최철원 (고려대학교 의과대학 내과학교실, 줄기세포연구소) ; 신상원 (고려대학교 의과대학 내과학교실) ; 김열홍 (고려대학교 의과대학 내과학교실) ; 김준석 (고려대학교 의과대학 내과학교실) ; 김영태 (고려대학교 의과대학 산부인과학교실, 줄기세포연구소) ; 김선행 (고려대학교 의과대학 산부인과학교실, 줄기세포연구소)
발행기관
학술지명
권호사항
발행연도
2003
작성언어
Korean
주제어
KDC
510.000
자료형태
학술저널
수록면
109-115(7쪽)
제공처
연구배경: 본 연구는 아데노 바이러스를 이용한 telomerase-antisense 발현이 SNU-3 배아 줄기세포 주로부터 조혈모세포로의 증식 및 apoptosis에 미치는 영향을 규명하고자 시행되었다.
방법: 배양된 배아 줄기세포를 배아체(embryonic body)로 만든 후 통상적인 LTC-IC assay를 시행한 대조군과 배아체를 telomerase antisense (Adenovirus 104 PFU/mL, 3 mL) 처리된 LTC-IC assay를 시행한 실험군으로 분류하여 각각 5차례에 걸쳐서 실험을 시행하였다. 양 군 간의 배양 5일 후 MACS법으로 분리된 CD34+ 세포 수, 생존율, 그리고 histone-DNA 비율의 측정을 통하여 apoptosis 정도 (ELISA 법, Cell Death Detection ELISAPLUS, Roche, Germany)를 분석하였으며 CFU-GM 배양을 통하여 분화, 증식능을 비교하였다.
결과: 대조군에서는 분리된 CD34+ 세포가 0.6~1.8 (중앙값: 1.1) ×10³이었고 TA 처리된 실험군에서는 분리된 CD34+ 세포가 0.8~2.1 (중앙값: 1.2) ×10³으로 실험군에서 유의한 차이가 없었다. Tryphan dye 염색 후 100개의 세포를 관찰하여 염색되지 않은 세포를 생존세포로 간주하여 그 백분율을 계산한 결과 대조군은 76~87 (중앙값: 81)% 실험군은 78~88 (중앙값: 83)%로 양 군 간에 차이가 없었다. 또한 세포들에서 각각 absorbance (A_405㎜~A_490㎜)의 차이로 apoptosis 정도를 비교한 결과(negative control: 0.020, positive control: 0.186), 각각 대조군에서는 0.092~0.134 (중앙값: 0.129), 실험군에서는 0.087~0.152(중앙값: 0.138) 값을 보임으로써 TA를 처리한 양 군 간에 유의한 차이가 없었다. 또한, CFU-GM 배양 집락 결과에서도 대조군은 0.1~0.5 (중앙값: 0.3)×10³, 실험군은 0.2~0.6 (중앙값: 0.4) ×10³로 양 군 간의 유의한 차이가 없었다.
결론: SNU-3 배아 줄기세포 주를 이용하여 아데노 바이러스를 통한 telomerase-antisense 발현이 세포 사멸이나 apoptosis에 유의한 영향을 미치지 않으면서 배아 줄기세포로부터 조혈모세포로의 분화, 증식을 방해하지 않음을 본 연구 결과 확인할 수 있었으나 추가 연구를 통한 확인이 필요하리라고 판단된다.
Background: This study was tried to evaluate the effect of adenovirus-mediated telomerase antisense (TA) expression on cellular proliferation and apoptosis of the ex-vivo culture from human embryonic stem cells to hematopoietic stem cells.
Methods: Cultured embryonic stem cells were classified to control and study groups. Control groups was that of which embryonic body were cultured to LTC-IC assay. Study group was that of which embryonic body were cultured to LTC-IC assay treated with telomerase antisense oligonucleotides (TA). We used adenovirus vector containing recombinant antisense telomerase template RNA. We evaluated CD34+ cell number and viable cell percentage and the degree of apoptosis of each samples at 5 days after LTC-IC assay and the results were compared between each groups.
Results: The number of CD34+ cells in study group (0.8~2.1 (median:1.2)×10³) showed no significant difference with that in control group (0.6~1.8 (median: 1.1)×10³). Viable cell percentage of control and study groups were 76~87 (median: 81)% and 78~88 (median: 83)%, respectively, without significant difference. And there was no difference of apoptosis degree (absorbance, A_(405nm)~ A_(490nm)) between control and study groups (0.092~0.134 (median:0.129) vs 0.087~0.152 (median: 0.138), negative control: 0.020, positive control: 0.186). The colony count of CFU-GM in control and study group was 0.1~0.5 (medium: 0.3)×10³ and 0.2~0.5 (medium: 0.3)×10³, respectively without no significant difference.
Conclusion: We found the phenomenon that adenovirus-mediated antisense expression of telomerase RNA doesn't interrupt the proliferation of embryonic stem cells to hematopoietic stem cells without significant effect on the apoptosis degree. Further studies will be warranted to confirm these results and verify the mechanism of these phenomena.
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