마우스 모델을 이용한 콕사키바이러스의 유전자 전달 및 백신 벡터의 활용성 연구 = Systemic analysis of a novel coxsackievirus gene delivery system in a mouse model and possibility of vector for vaccination
저자
발행사항
부천 : 가톨릭대학교 대학원, 2009
학위논문사항
학위논문(석사) -- 가톨릭대학교 대학원 : 생명공학과 생명공학 전공 2009.2
발행연도
2009
작성언어
한국어
주제어
DDC
660.6 판사항(21)
발행국(도시)
경기도
형태사항
ix, 61 p. : 삽도, 도표 ; 26 cm.
일반주기명
국,영문초록 포함
지도교수: 남재환
참고문헌(p. 50-61) 포함
소장기관
콕사키바이러스 B3(Coxsackeivirus B3, CVB3)를 이용하여 in vivo로 외부 유전자 전달 능력을 시스템적으로 조사하기 위해 레닐라 유전자를 포함하는 재조합 콕사키바이러스(CVB3-renilla)를 제작하였다. CVB3-renilla는 마우스 장기에서 일시적이며 많은 양의 레닐라 단백질을 발현하였으며 특히 췌장에서 두드러진 발현을 보였다. 이러한 발현양은 바이러스 타이터에 비례하였고 CVB3-renilla는 약독화된 특징을 보였다. 아데노바이러스 벡터 시스템과 비교하였을 때 재조합 콕사키바이러스의 외부 유전자 발현양이 더욱 많았다. 콕사키바이러스에 대한 항체가 존재 하는 마우스에서 CVB3-renilla는 레닐라 유전자를 발현하지 못했으나, 복강 내 장기에 직접 이 바이러스를 투여함으로서 극복 가능하였다. 콕사키바이러스 벡터는 마우스 모델에서 외부 유전자를 일시적으로 강하게 발현 할 수 있는 벡터로서 유용함을 보여 주었다. 또한 콕사키바이러스 벡터 시스템의 백신 벡터로서 사용가능성을 확인하기 위해 인간유두종바이러스(Humanapapillomavirus)의 E7 단백질을 발현하는 재조합 콕사키바이러스(YYFF-HPV16 E7)을 제작하였고, 예방용 또는 치료용 백신으로서 가능성을 확인하여 보았다. YYFF-HPV16 E7는 E7 유전자를 잘 발현하고 있었으나, 종양 동물 모델(C57BL/6)에 콕사키바이러스의 감염이 잘 이루어지지 않아 벡터의 유용성을 확인하기 어려웠다. 콕사키바이러스에 의한 감염과 면역반응이 잘 유도되는 마우스 모델을 사용한 실험이 더 필요할 것으로 생각된다.
더보기In order to systemically investigate the possibility of using coxsackievirus B3 (CVB3) to deliver foreign genes in vivo, a recombinant strain of CVB3 encoding the renilla gene (CVB3-renilla) was constructed. The recombinant CVB3 resulted in extensive and transient expression of the renilla protein within mouse organs, especially the pancreas. The level of expression was generally dependent upon the viral titer present. Moreover, the CVB3-renilla strain was completely attenuated. Interestingly, the recombinant CVB3 vector was expressed much more strongly in mouse organs than was a comparable adenoviral vector. The CVB3-renilla strain did not express the renilla gene in mice with pre-existing coxsackievirus-specific neutralizing antibodies, but direct organ-specific administration of the virus during open-peritoneum surgery was able to circumvent this immunity. This coxsackievirus vector may represent a useful means for delivering and expressing foreign genes in mouse models in an acute and extensive fashion.
Moreover, we demonstrate that immunization of mice with the recombinant CVB3 encoding humanpapillomavirus16 E7 gene(YYFF-HPV16 E7) induces strong cytotoxic T-lymphocyte (CTL) activity and helps to eradicate established tumors. The prophylactic and therapeutic efficacy of YYFF-HPV16 E7 was also confirmed. However, the tumor volumes in the immunized group were not as significantly reduced as was the case with the controls. We tested CVB3 growth in tumor model mice (C57BL/6). In this regard, CVB3 replication was found to not be as effective, and no immune response was induced in the mice. To this end, further experiments need to be conducted on the recombinant coxsackievirus using this mouse model, which is regarded as yielding better observations in terms of infection and immune response.
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