Kiwi pectinesterase 저해제의 정제 및 특성 = Separation and Characteristics of Kiwi Pectinesterase Inhibitor
저자
고은경 (목포대학교 원예육종학과 ) ; 김명화 (목포대학교 원예육종학과 ) ; 허원녕 (목포대학교 원예육종학과 )
발행기관
목포대학교 자연자원개발연구소(The Institute of Natural Resource Development Mokpo National University)
학술지명
권호사항
발행연도
1999
작성언어
Korean
주제어
KDC
321.3
자료형태
학술저널
수록면
7-16(10쪽)
제공처
Kiwi pectinesterase inhibitor(PEI)를 분리하기 위하여 CNBr-sepharose 4B에 orange pectinesterase(PE)를 공유결합으로 결합시켜 affinity chromatography용 수지를 제조하였다. 제조된 수지를 사용하여 PEI를 강력하게 선택적으로 결합시켜 pH 9.5의 높은 이온 강도를 갖는 용액으로 단일한 활성 peak로 용출·분리하였다. 분리된 kiwi PEI의 분자량은 12.5% SDS-PAGE 전기영동상에서 약 16.6 KDa 정도의 밀접한 이중 band로 나타났다.
분리된 PEI를 -25,℃ 5℃ 및 실온에서 30일 동안 보관·저장하였을 때 냉장, 냉동상태에서는 저해활성이 2주정도 경과시 25% 정도 감소하고 그 이후에는 큰 변화 없이 유지되었으나, 실온에서는 저해활성이 급격히 감소하여 저장 4주 정도에 거의 활성을 상실하였다.
이들의 활성특성을 조사해 본 결과 최적저해활성 pH는 7.5이고 최적저해반응 온도는 20℃였고, 70℃까지는 내열성을 지녔다. 또한 0.2M NaCl의 기질농도에서 최적저해 활성을 나타내었으며, kiwi PEI의 PE에 대한 저해작용은 noncompetitive inhibition인 것으로 나타났다.
The resin for affinity chromatography was prepared to separate pectinesterase inhibitor(PEI) from ripened kiwi fruit(Actinidia chinensis) by CNBr-activated Sepharose 4B being covalently bound by orange petinesterse(PE). The affinity resin strongly and selectively bound PEI, which could be eluted in high yield as a single, homogeneous and sharp peak by pH 9.5 without loss of inhibitory activity. The separated PEI had maintained almost inhibitory activity at -25℃ and 5℃ during 30 days but lost it at room temperature in 4 weeks. The PEI possessed a molecular weight of 16.6 KDa, as estimated by 12.5% SDS-PAGE.
The optimum pH, the optimum temperature, the thermostable range and NaCl concentration of substrate for PEI inhibitory activity appeared to be 7.5, 20℃, below 70℃ and 0.2 M respectively. The kind of inhibition on tomato pectinesterase was found to be noncompetitive, using citrus pectin as substrate.
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