본 연구는 전분 분해능이 우수한 새로운 Aspergillus 균주를 개발하기 위하여 α amylase 의 생산력이 우수한 Aspergillus oryzae var. oryzae 의 핵을 순수분리하여 Aspergillus nidulans 514 의 원형질체에 전달하는 핵전이법을 이용, 종간잡종을 형성시킨 후, 이들 잡종으로부터 α-amylase 생산력이 증대된 우수균주를 선별하고자 하였다.
1. 원형질체 형성에 대한 최적 조건은 0.6 M (NH_4)_2SO_4를 삼투안정제로 하여 1% Novozym 234 를 30℃ 에서 90 분간 반응시켰을 때 원형질체 형성율 이 가장 높았다. 이때, 최적 pH 는 5.8이었다.
2. 원형질체 재생율은 5.6 9.1 % 로 나타났다.
3. A. nidulans 514의 원형질체에 A. oryzae var. oryzae 로부터 순수분리한 핵을 핵전이 시킴으로써 형질전환체를 얻었다. 형질전환율은 약 0.2 % 로 나타났다.
This study has been performed to develop an Aspergillus strain having high α amylase production ability using nuclear transfer method. Nuclei isolated from the wild type Aspergillus oryzae var. oryzae strain were transferred into auxotrophic aspergillus nidulans 514 mutants and selected the new strains showing an increased starch degrading capability. The optimum conditions for protoplast formation were treated with 0.6M (NH4)2SO4, pH5.8 and 1.0% Novozym 234 for 90mins at 30℃. The frequency of protoplast regeneration was 5.6~9.1% in the above conditions and the frequency of transformation by the nuclear transfer was about 0.2 %. The hybrids in which α amylase activity was increased about 0.85~2.88 folds and The optimal pH and temperature for α amylase activity were 5.0 and 40℃, respectively. This enzyme was stable in the range of pH 3.0~6.0 and 30℃~60℃. The patterns for total soluble protein of parental strains was different from that of hybrids. The conidial size and DNA content of hybrids were increased to 1.09~2.09 folds and 1.09~2.72 folds, respectively.
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