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강낭콩 키틴분해효소 유전자의 클로닝 = Molecular Cloning of Chitinase Gene from Bean (Phaseolus vulgaris L) Leaves
저자
조유영 ( Jo Yu Yeong ) ; 지명심 ( Ji Myeong Sim ) ; 정우진 ( Jeong U Jin ) ; 국주희 ( Gug Ju Hui ) ; 박노동 ( Park No Dong ) ; 김옥란 ( Kim Og Lan )
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2004
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-주제어
KDC
400
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KCI등재
자료형태
학술저널
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1-5(5쪽)
제공처
식물-미생물 상호작용에 관한 연구의 하나로 병저항성 단백질인 키틴분해효소(chitinase, EC 3.2.1.14)의 유전자를 강낭콩 잎에서 cloning하였다. 강낭콩 잎으로부터 genomic DNA를 추출하여 Sau3AI으로 소화시킨 후 pUC19에 삽입시키고 E. coli JM109에 형질전환시켰다. 이를 rice chitinase cDNA (1.1 kb)를 probe로 이용하여 cology hybridization과 Southern blotting을 통해 8개의 clone을 획득하였다. Chitinase의 hevein domain 가운데 10개의 아미노산의 서열을 지령하는 30 mer ologonucleotide를 둥 labelling하여 이를 probe로 사용해서 앞에서 획득한 8개의 clone 가운데 강한 signal을 띠는 4개의 clone을 선발하였다. 이 clone들을 각각 pCHTs, pCHT5, pCHT7, pCHT8 이라 명명하였으며, 이들의 insert 크기는 각각 7kb, 5.61 kb, 5.3 kb, 4.5 kb였다. Clone pCHT3, pCHT5, pCHT8를 배양하면 이들은 균체내에 chitinase를 발현하였다. 이중, pCHT3은 4개의 EcoR1 부위와 1개의 HindⅢ, 그리고 각각 2개의 BarnHI과 Kph1 부위를 가진 것으로 확인되었다.
Genomic DNA from bean (Phaseolus vulgaris L) leaves was prepared, digested with Sau3AI, ligated with the dephosphorylated pUC19, and introduced into Escherichia coli JM109. The chitinase gene-harboring transformants were confirmed by colony hybridization and Southern blot hybridization. Four positive clones were obtained and named pCHT3, pCHT5, pCHT7, and pCHT8, and their insert size was 7 kb, 5.6kb and 4.5kb, respectively. The insert DNA of pCHT3 has four EcoFI sites, one Hind III site, two BamHI site and two KpnI sites. The chitinase activities were intracellularly located in the E. coli transformants harboring the genomic chitinase DNA.
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