일반연제(포스터) : P-22 ; M. massiliense and 와 M. abscessus의 구별을 위한 간단한 erm PCR 소개
저자
발행기관
학술지명
임상미생물검사학회 발표자료집(The Korean Society for Clinical Laboratory Microbiology)
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발행연도
2013
작성언어
Korean
자료형태
학술저널
수록면
71-71(1쪽)
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배경: Mycobacterium abscessus는 비결핵 항산균(Nontuberculous mycobacteria, NTM)에 속하는 신속 발육균 중 하나로 폐질환을 일으키는 주요 원인균으로 알려져 있는데 최근 염기서열에 따라 M. abscessus, M. massiliense, M. bolletii 3가지 아속으로 분리하고 각각의 균종이 가진erythromycin ribosome methyltransferase gene (erm)의 염기서열에 따라 microlide 계열 약제에 내성 또는 감수성을 보이게 됨이 밝혀져 M. massiliense 와 M. abscessus를 구분하여 동정하는 것은 반드시 필요하게 되었다. 하지만 현재 저자들이 사용중인 NTM 동정 제품은 M. massiliense 를 동정할 수 없어 저자들은 일단 M. abscessus로 검출된 균주를 sequencing 방법을 통해 구분하여 임상에 보고하여 왔는데 최근 논문(Hee-Youn Kim et al, Microbiol Immunol, 2010)에 보고된 간단한 PCR 방법을 통해 이 두 가지 균을 분리 동정할 수 있었던 경험을 소개하고자 한다. 방법: 본 검사실에 NTM동정 검사가 의뢰된 액체배지를 PCR-Hybrid 방법(Genotype Mycobacterium, HAIN, Germany)을 이용 M. abscessus로 동정된 13검체를 대상으로 염기서열 분석방법과 간단한 erm PCR 방법으로 검사하여 비교하였다. 먼저 DNA는 액제배지에서 배양된 균주 1 mL을 resin buffer를 이용 끓여서 추출하였고 염기서열 방법은 rpoB gene을 분석하여 동정하였다. 그리고 간단한 erm PCR 방법은 PCR mixture (2x multiplex PCR mix, SolGent, Korea) 12.5 uL에 ermF (5’GAC CGG GGC CTT CTT CGT GAT-3)와 ermR (5’-GAC TTC CCC GCA CCG ATT CC-3’) 10 pmol primer를 각각 1.5 uL 그리고 증류수 4.5 uL를 혼합 후 5 uL의 DNA를 첨가하여 C1000 Thermocycler (Biorad, USA)로 증폭하였다. PCR Condition은 95℃ 10분 1 cycle, 95℃ 30초, 58℃ 30초, 72℃ 1분 35 cycle, 72℃ 10분 1 cycle 이었다. 증폭 후의 산물은2% agarose gel에 전기영동하여 예상 밴드를 확인하였다. 결과: PCR-Hybrid 방법으로 동정된 M. abscessus 13개 검체 중 8개 검체는 rpoB gene을 이용한 염기서열 분석방법에서 M. massiliense로 동정되었고 5개 검체는 M. abscessus로 동정되었다. 그리고 간단한 emr PCR 방법에서도 모두 동일하게 8개 검체는 397 bp, 5개 검체는 673 bp 위치에 밴드가 나타났는데 이 증폭된 산물을 ermF.R primer를 이용 sequencing 분석결과 M. massiliense는 emr gene이 결손되어 크기가 적은 397bp에, M. abscessus는 emr gene의 존재로 673 bp에 band가 나타나고 있음을 확인하였다. 고찰: 간단한 erm PCR방법은 microlide계 약제에 내성을 보이는 것으로 알려진 M. abscessus와 감수성을 보이는 것으로 알려진 M. massiliense를 구분하는데 있어서 시간과 비용이 상대적으로 많이 소요되는 염기서열 분석방법보다 효율적인 검사방법으로 현재 두 균을 분리할 수 없는 NTM동정시약을 사용하는 검사실에 유용할 것으로 사료된다.
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