P-37 : MPCR 방법에 의한 임상검체에서 분리한 VRE 세균의 신속 검출

국문 초록 (Abstract)

배경: Enterococci는 건강한 성인의 경우 대장에 상주하는 정상세균이다. 1986년 프랑스에서 vancomycin-resistant enterococci (VRE)보고 된 후 병원내 감염으로 증가 추세에 있고, 요로감염, 심내막염등의 기회감염을 일으킨다. VRE는 다양한 항생제에 저항성을 나타내고, 여러 종의 내성유전자 중 vanA와 vanB 유전형이 가장 많다. vanA 유전자를 가진 Enterococci는 vancomycin 과 teicoplanin의 고농도에 저항성을 보인고 vanB의 경우는 vancomycin만 내성을 보인다. 표현형에 의한 VRE 검출은 시간이 많이 소요되고, 저농도 VRE의 정확한 검출은 병원 내 감염전파의 추적과 관리를 위해서 필요하다. PCR방법은 임상 분리균주의 검출 및 항생제내성유전자 분석에 특이적이고, 시간적인 소모가 적고 분석력과 재현성이 좋은 방법이다. 본 연구에서는 대학병원으로부터 VRE 균주를 분리하여 종특이유전자 및 vanA, vanB 유전자를 대상으로 multiplex PCR 방법을 실시하여 표현형과 유전자형을 비교 분석하였다. 방법: 항생제감수성검사는 세균 부유액을 Mueller-Hinton Agar (MHA)에 고르게 접종한 후, 배지의 중앙에는 vancomycin (30 ㎍)디스크와 teicoplanin (30 ㎍)있는 디스크를 20 mm간격으로 놓았다. 접종 배지는 37℃ 항온기에 18시간 배양 후 결과를 판독하였다. clinical and laboratory standards institute (CLSI) 가이드라인에 따라 판정하였다. Enterococcus 종 동정 및 항생제 내성유전자 검출은 PCR 혼합액 dNTP (각기 2.5 mM), 10× PCR buffer 2 μL, primer 4쌍 10 pmol 각각 1 μL씩 넣었고, genomic DNA (25 ㎍) 1 μL, Taq DNA polymerase (2 unit) 1 μL, 최종반응액은 증류수로 20 μL 되게끔 실시하였다. DNA thermal cycler (Perkin Elmer, Wellesley, USA)에서 94℃에서 2분간 변성, 58℃에서 1분간 접합, 68℃에서 1분간 확장의 순서로 30회를 시행하고 68℃에서 7분간 최종확장 하였다. 결과: 디스크감수성 시험에서는 vancomycin 디스크에서는 23 균주(100%)가 내성으로 나타났다. teichoplanin 디스크에도 모든 균주가 내성으로 나타났다. multilex PCR에서는 22균주(95%)가 E. faecium 세균으로 검출 되었으며, 15번 균주는 검출되지 않았다. VanA 생성 Enterococci 균주는 22균주 (95%)가 양성으로 나타났으며 15번 균주가 음성으로 나타났으며, VanB생성 Enterococci 균주는 검출되지 않았다.