Human a-Synucleins을 위한 형광표지 리포좀 결합분석법의 개발 = The development of fluorescenece-labelled liposome binding assay for human a-Synucleins
저자
발행기관
학술지명
권호사항
발행연도
2004
작성언어
Korean
주제어
KDC
510
자료형태
학술저널
수록면
107-118(12쪽)
제공처
소장기관
Purpose : To understand the mechanism of interaction between a-Synuclein and phospholipid membrane, a quantitative method analyzing the binding of a-Synuclein to the phospholipid membrane was invented with fluorescence-labelled phospholipid liposome and this method was applied to the human a-Synuclein mutants.
Materials and Methods : The phospholipid liposome was made of cholesterol, phosphatidylcholine and phosphatidylserine. Wild type and pathogenic mutnats (A30P, E46K. A53T) of human a-Synuclein was expressed and purified as GST-fusion proteins. Liposome binding assay was done with phospholipid liposome and GST-fusion human a-Synucleins.
Results : Liposome binding assay was optimised for several parameters such as the concentration of protein and liposome, incubation time and temperature. At this optimised condition, the strength of binding to the phospholipid liposome was observed as such A30P < A53T .wild type < E46K.
Conclusion : Liposome binding assay invented and optimized in this study is expected to be a useful tool for examining the relationship between the structure and the function of a-Synucleins.
연구목적: Human a-Synuclein과 phospholipid membrane과의 상호작용기전을 이해하고자, fluorescence-labelled phospholipld liposome을 이용하여 a-Synuclein 의 phospholipid membrane bmding을 정량분석하는 기술블 개발하고, 이를 human a-Synuc1ein 의 mulant 에 적용 하고자 히였다.
대상 및 방법: Cholesterol. phosphatidylcholine, phosphatidyserine으로 구성된 phospholipid liposome을 만들어 GST-융합 재조합 단백질로서 발현된 human a-Synuclein의 wild type 및 pathogenic mutant (A30P, E46K, A53T)와의 binding을 측정하였다.
결과: 형광표지를 이용한 liposome binding assay를 개발하고, 단백질 및 phospholipid 농도, 반응시간 및 온도 등 여러 가지 조건을 최적화 하였다. 이 조건에서 human a-Synuclein의 phospholipid liposome에 대한 binding 강도는 A30P < A53T ~ wild tupe M < E46의 순서였다.
결론: 본 연구에서 개발한 liposome binding assay는 앞으로 a-Synuclein의 구조와 기능을 연구하는데 유용한 연구수단으로 이용될 수 있을 것으로 예상된다.
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