비천연 아미노산을 Suppressor tRNA에 결합하는 ARS 탐색을 위한 Positive Selection System의 개발
저자
발행기관
한국외국어대학교 외국학종합연구센터 부설 기초과학연구소(Institute of Basic Sciences Center for Foreign Studies)
학술지명
권호사항
발행연도
2003
작성언어
Korean
KDC
400.000
자료형태
학술저널
수록면
65-72(8쪽)
제공처
소장기관
Orthogonal suppressor tRNA와 aminoacyl-tRNA synthetase(ARS) 쌍은 비천연 아미노산을 단백질의 특정위치에 삽입하는 방법의 개발을 위하여 활용되고 있다. 돌연변이를 유발한 ARS library 로부터 suppressor tRNA에 비천연 아미노산을 결합하는 유전자 변형된 ARS를 탐색하기 위한 screening system을 제작하기 위하여 ß-lactamase 유전자의 Phe21, Glu61, 그리고 His156 codon을 단독 또는 중복되게 amber codon 으로 site-directed mutagenesis 하였다. Amber mutation 된 ß-lactamase gene을 supE를 가지고 있는 DH5?F‘과 가지고 있지 않은 DH10B에 각각 형질변환하고 ampicillin을 포함한 배지에서 배양하여 colony의 형성을 비교하였다. 그 결과 DH5?F’에서만 ?-lactamase가 발현되어 세포가 살았으며, DH10B에서는 colony가 형성되지 않았다. ?-lactamase에 삽입된 amber codon의 수가 늘어남에 따라 DH5?F’에서도 생성되는 colony의 수가 줄었으며, 3개의 amber codon이 삽입되었을 경우는 colony가 나타나지 않았다.이러한 결과는 ?-lactamase의 amber mutant가 비천연 아미노산을 suppressor tRNA에 결합하는 mutant ARS를 탐색하는데 유용하게 사용될 수 있음을 보여주고 있다.
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