상피성장인자가 치주인대세포 및 치은섬유아세포의 증식능에 미치는 영향 = The Effect of the Epidermal Growth Factor on Proliferation Rate of the Human Periodontal Ligament Cells and Human Gingival Fibroblasts
저자
김선우 (Department of Dentistry Graduate School, Kyungpook National University)
발행기관
학술지명
권호사항
발행연도
1996
작성언어
Korean
KDC
515.000
자료형태
학술저널
수록면
214-230(17쪽)
제공처
소장기관
성장인자 가운데 미분화중배엽세포의 활성을 조절하는 것으로 알려진 상피성장인자를 초기배양한 치주인대세포와 치은섬유아세포에 각기 다른 농도와 시간에 따라 주입하였을 때 두 세포의 세포증식능에 미치는 영향을 알아보고 각 조건에 따른 두 세포간의 증식능을 상호 비교해 보고자 본 실험을 실시하였다.
교정치료를 목적으로 내원한 환자의 제 1 소구치 부위의 정상치은을 절제하고, 건강한 제 1 소구치를 발거하여 치은섬유아세포와 치주인대세포를 분리, 배양하여 상피성장인자를 주입시키지 않은 군을 대조군으로 하고 상피성장인자를 각각 1, 10, 50, 100, 200ng/ml로 실험군으로 하여 24시간, 48시간, 72시간 동안 배양하였으며, 각 시간별 배양 6시간전에 10μl/200 ml 5-Bromo-2'-deoxy-uridine을 첨가하여 5-Bromo-2'-deoxy- uridine이 DNA내로 편재되는 양으로써 두세포군의 증식능을 측정하여 다음과 같은 결과를 얻었다.
치은섬유아세포에 상피성장인자를 주입후 24,48,72시간 동안 배양시 각시간별로 농도의존형으로 증가하는 경향을 보였으며 48시간까지 세포의 증식능이 증가 하였다가, 72시간 배양시에는 24,48시간 배양시에 비해 증식능이 전반적으로 감소하는 경향을 보였다. 24시간 배양시에느 1,10Πg/ml를 제외한 모든 실험군에서, 48시간 동안 배양시에는 1Πg/ml를 제외한 모든 실험군에서, 72시간 배양시에는 1, 10, 100Πg/ml를 제외한 모든 실험군에서 대조군에 비해 통계적으로 유의한 차이(P<0.01,P<0.05)를 나타내었다.
치주인대세포에 상피성장인자를 주입후 24,48,72시간 동안 배양시 24시간에서는 농도의존적으로 미약한 증가를 보이다가 200Πg/ml에서 감소하는 경향을 보였으며, 48시간에서는 농도의존적으로 증가하다가 72시간에서는 24시간과 유사한 양상을 보였다., 24, 72시간 배양에서는 48시간 배양에 비해 증식능이 감소하는 경향을 보였다. 24,48,72시간 배양시 모두에서 1Πg/ml를 제외한 모든 실험군에서 대조군에 비해 통계적으로 유의한 차이(P<0.01,P<0.05)를 나타내었다.
치주인대세포와 치은섬유아세포의 증식능을 비교해 보면, 24시간 배양시에 모든 실험군에서 치주인대세포가 치은섬유아세포보다 조금 더 낮은 경향을 나타애었고, 두 세포 상호간에도 모든 실험군에서 통계적으로 유의한 차이 (P<0.01)를 나타내었다. 48시간 배양시에는 모든 실험군에서 치주인대세포가 치은섬유아세포보다 증식능이 더 높은 경향을 나타내었으며, 두 세포 상호간에 통계적으로 유의한 차이 (P<0.01,P<0.05)는 나타내지 않았다. 72시간 배양시에는 1Πg/ml까지 치주인대세포가 더 낮은 증식율을 보이다가 10Πg/ml이상에서는 치주인대세포가 치은섬유아세포보다 그 증식능이 더 높은 경향을 나타내었으며, 두 세포 상호간에 50,200Πg/ml를 제외한 모든 실험군에서 통계적으로 유의한 차이(P<0.01,P<0.05)를 나타내었다.
Epidermal growth factor(EGF) is one of polypeptide growth factors. EGF has been reported as a biological mediator which regulates activities of wound healing process including the cell proliferation, migration and metabolism.
The purposes of this study is to evaluate the effects of EGF on the human periodontal ligament cells and human gingival fibroblast cells that promote regeneration of periodntal tissue. The mitogenic effects of epidermal growth factor on human periodontal ligament cells and human gingival fibroblasts were evaluated by dentermining the incorporation of 5-Bromo-2'-deoxy-uridine into DNA of the cells in a dose dependent manner.
The prepared cells were the primary cultured gingival fibroblast and periodontal ligament cells from humans, the fourth or sixth subpassages were used in the experiments.
Cells were seeded in DMEM containing 10% FBS. 1, 10, 50, 100, 200Πg/ml and epidermal growth factor were added to the quiescent cells for 24 hours, 48 hours and 72 hours. They were labeled with 10μl/200μl 5-Bromo-2'-deoxy-uridine for the last 6 hours of each culture. The results of the five determinants were presented as mean and S.D..
The results were as follows:
The DNA synthetic activity of human gingival fibroblasts were increased dose dependently by epidermal growth factor at 24 hours, 48hours and 72 hours. The mitogenic effects were similar at the 24 and 48 hours of epidermal growth factor, but the DNA synthetic afctivity of human gingival fibroblasts generally decreased at 72 hours.
The DNA synthetic activity of human periodontal ligament cells were increased dose dependently by epidermal growth factor at 24 hours but the DNA synthetic activity decreased at 200Πg/ml of each hour. Generally the maximum mitogenic effects were observed at the 48 hours application of epidermal growth factor. The DNA synthetic activtity of human periodontal ligament cells generally decreased lower at 24,72 hours than at 48 hours the application of epidermal growth factor.
In the comparison of DNA synthetic activity between human gingival fibroblasts and human periodontal ligament cells, human periodontal ligament cells had slightly higher proliferation activity than human gingival fibroblasts for a longer time at the high dosage of the epidermal growth factor.
In conclusion, epidermal growth factor have important roles in the stimulation of DNA synthesis in human periodontal ligament cells and human gingival fibroblasts, and thus may be useful for clinical applications in periodontal regenerative procedures.
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