KCI등재
Neurosphere and adherent culture conditions are equivalent for malignant glioma stem cell lines
저자
Maryam Rahman (Department of Neurosurgery, University of Florida, Gainesville, FL, USA) ; Karina Reyner (Department of Neurosurgery, University of Florida, Gainesville, FL, USA) ; Loic Deleyrolle (Department of Neurosurgery, University of Florida, Gainesville, FL, USA) ; Sebastien Millette (Department of Neurosurgery, University of Florida, Gainesville, FL, USA) ; Hassan Azari (Shiraz University) ; Bryan W. Day (Brain Cancer Research Unit, Queensland Institute of Medical Research, Brisbane, Queensland) ; Brett W. Stringer (Brain Cancer Research Unit, Queensland Institute of Medical Research, Brisbane, Queensland) ; Andrew W. Boyd (Brain Cancer Research Unit, Queensland Institute of Medical Research, Brisbane, Queensland) ; Terrance G. Johns (Monash Institute of Medical Research, Monash University, Clayton, Victoria, Australia) ; Vincent Blot (CovX Research, Pfizer Worldwide Research and Development, San Diego, CA) ; Rohit Duggal (Genelux Corporation, SanDiego, CA, USA) ; Brent A. Reynolds (Department of Neurosurgery, University of Florida, Gainesville, FL, USA,)
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2015
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English
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KCI등재,ESCI
자료형태
학술저널
수록면
25-42(18쪽)
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소장기관
Certain limitations of the neurosphere assay (NSA) have resulted in a search for alternative culture techniques forbrain tumor-initiating cells (TICs). Recently, reports have described growing glioblastoma (GBM) TICs as a monolayer usinglaminin. We performed a side-by-side analysis of the NSA and laminin (adherent) culture conditions to compare the growthand expansion of GBM TICs. GBM cells were grown using the NSA and adherent culture conditions. Comparisons weremade using growth in culture, apoptosis assays, protein expression, limiting dilution clonal frequency assay, genetic affymetrixanalysis, and tumorigenicity in vivo. In vitro expansion curves for the NSA and adherent culture conditions were virtuallyidentical (P=0.24) and the clonogenic frequencies (5.2% for NSA vs. 5.0% for laminin, P=0.9) were similar as well. Likewise,markers of differentiation (glial fibrillary acidic protein and beta tubulin III) and proliferation (Ki67 and MCM2) revealedno statistical difference between the sphere and attachment methods. Several different methods were used to determine thenumbers of dead or dying cells (trypan blue, DiIC, caspase-3, and annexin V) with none of the assays noting a meaningfulvariance between the two methods. In addition, genetic expression analysis with microarrays revealed no significant differencesbetween the two groups. Finally, glioma cells derived from both methods of expansion formed large invasive tumors exhibitingGBM features when implanted in immune-compromised animals. A detailed functional, protein and genetic characterization ofhuman GBM cells cultured in serum-free defined conditions demonstrated no statistically meaningful differences when grownusing sphere (NSA) or adherent conditions. Hence, both methods are functionally equivalent and remain suitable options forexpanding primary high-grade gliomas in tissue culture.
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