Characterization of Recombinant Autographa californica Nuclear Polyhedrosis Virus (NPV) Expressing the β-Galactosidase Gene in both Sf21 and Bm5 Cells by Bombyx mori
저자
Jin, Byung Rae (Laboratory of Insect Genetic Engineering, National Sericulture & Entomology Research Institute, RDA) ; Yoon, Hyung Joo (Laboratory of Insect Genetic Engineering, National Sericulture & Entomology Research Institute, RDA) ; Kang, Seok Kwon (Division of Applied Biology and Chemistry, College of Agriculture & Life Sciences, Seoul National University) ; Choudary, Prabhakara V. (Antibody Engineering Laboratory, Department of Entomology, University of California)
발행기관
東亞大學校附設遺傳工學硏究所(The Genetic Engineering Research Institute Dong-A University)
학술지명
권호사항
발행연도
1998
작성언어
English
KDC
476.1
자료형태
학술저널
수록면
93-99(7쪽)
제공처
소장기관
Genomic DNA of recombinant AcNPV expressing B-galactosidase was cotransfected with p143helicase gene of BmNPV into Sf21 celis. Ac-Bm hybrid viruses capable of replicating in both Bm5 and Sf21 cells were isolated. Ac-Bm hybrid viruses expressing B-galactosidase either at the highest (Ac-Bm hybrid virus-HE) or lowest (Ac-Bm hybrid virus-LE) level were chosen for the characterization of B-galactosidase expression in Bm5 and Sf21 cells. Expression level of B-galactosidase and replication of Ac-Bm hybrid virus-He in Sf21 cells were nearly identical to those of recombinant AcNPV. Furthermore, replication of Ac-Bm hybrid virus-HE in Bm5 cells was similar to that of wild-type BmNPV, and Ac-Bm hybrid virus-HE clearly expressed B-galactosidase in Bm5 cells. However, expression of B-galactosidase by Ac-Bm hybrid virus-HE in Bm5 cells was significantly lower than that expressed in Sf21 cells. The titer or Ac-Bm hybrid virus-HE determined by plaque assays in Bm5 cells was similar to that determined in Sf21 cells, but the plaque size formed by Ac-Bm hybrid virus-HE in Bm5 cells was apparently smaller than that formed in Sf21 cells. In addition, expression levels and virus titers of Ac-Bm hybrid virus-LE in Sf21 and Bm5 were significantly lower than those of Ac-Bm hybrid virus-HE. Therefore, DNA sequences were determined for the region of the p143 gene controlling the host range in Ac-Bm hybrid viruses. The results showed that the deduced amino acid sequences of Ac-Bm hybrid virus-LE were different at position 461, 470, 514, and 528 from those of BmNPV. In conclusion, our results clearly demonstrated that Ac-Bm hybrid virus-HE has an additional advantage of expanded host range for producing recombinant proteins.
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