건조 혈액 여과지에서의 β-Globin DNA와 RNA의 추출 및 그 안전성에 관한 검토 = Evaluation of Microextraction and Stability of β-Globin DNA and RNA from Dried Blood Filter Papers
저자
김덕인 (동아대학교 생명과학연구소) ; 김인후 (동아대학교 의과대학 생화학교실) ; 김정만 (동아대학교 의과대학 임상병리학교실) ; 한진영 (동아대학교 의과대학 임상병리학교실) ; 오성용 (동아대학교 생명과학연구소) ; 최용천 (동아대학교 의과대학 약리학교실)
발행기관
東亞大學校附設遺傳工學硏究所(The Genetic Engineering Research Institute Dong-A University)
학술지명
권호사항
발행연도
1996
작성언어
English
주제어
KDC
476.1
자료형태
학술저널
수록면
83-89(7쪽)
제공처
소장기관
연구배경: Guthrie spot는 1963년부터 신생아 유전 질환의 선별검사에 사용되기 시작한 이후로 최근에는 DNA와 RNA를 이용한 분석에도 응용이 시도되고 있다. 저자들은 일반 여과지에 채취된 건조 혈액으로부터 β-globin 유전자의 DNA와 RNA를 추출하는 데에 있어서 여과지의 전처리 조건이 미치는 영향과 특히 장기 보관에 따른 RNA의 안정성을 살펴보고자 하였다.
방법: 전처리를 하지 않은 경우, 5% HCI로 전처리를 한 경우, 고압 멸균을 한 경우, 그리고 5% HCI 전처리 후 고압 멸균을 한 경우의 네가지로 나누어서 정상인의 혈액을 떨어뜨린 후 상온에서 2주 동안 보관하였다가 각각 DNA와 RNA를 추출하여 PCR과 RT-PCR을 실시하였다. 그리고 2년간 보관하였던 전처리를 하지 않은 건조 혈액 여과지에서 RNA를 추출하여 RT-PCR을 시행하고 염기서열 분석을 하여 β-globin 유전자인지를 확인하였다.
결과: 여과지의 전처리 여부에 관계없이 DNA와 RNA는 PCR에 의해 기대된 크기의 증폭 산물을 나타내었고, 2년간 장기 보관하였던 여과지에서도 RNA가 안정하게 보존되어 있어서 RT-PCR 생성물을 염기서열 분석한 결과, β-globin 유전자의 일부임을 확인할 수 있었다.
결론: 건조 혈액 여과지를 이용한 β-globin 유전자의 DNA와 RNA 분석은 검체의 채취와 보관이 용이하고 안정성이 높아서 혈색소 이상증을 포함한 유전 질환의 대규모 연구나 선별 검사에 매우 유용할 것으로 사료된다.
Background: Since newborn screening efforts were facilitated by the use of Guthrie spots in 1963, the development of a routine procedure for microextraction of DNA and recently even RNA from these specimens would allow direct screening at the molecular level. The purpose of the current investigation was to optimize pretreatment condition of filter paper for improvement of microextraction and stability of β-globin DNA and RNA from dried blood specimens on Whatman filter papers.
Methods: Normal whole blood was spotted on filter papers pretreated by four different ways, respectively ; untreated, 5% HCI treated, autoclaved, and 5% HCI treated and autoclaved. The samples were then stored at room temperature for two weeks until processed. DNA and RNA were extracted from each filter paper and amplified by PCR(polymerase chain reaction) and RT(reverse transcriptase)-PCR. We also extracted RNA from untreated dried blood spot stored at room temperature for two years for cDNA synthesis and did nucleotide sequencing to identify that the PCR products were part of β-globin gene.
Results: DNA and RNA were stable in filter papers, and could be microextracted for PCR and RT-PCR regardless of pretreatment conditions. It also has been demonstrated that RNA could be obtained from dried blood spots stored for two years in sufficient quality and quantity for amplification and sequencing.
Conclusion: The prolonged stability of β-globin DNA and RNA in these specimens will be very helpful for conducting a mass screening and research in genetic diseases including hemoglobinopathies principally because of the ease of sample collection, storage, handling, and shipment.
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