Human tyrosinase 유전자의 대장균에서의 발현 = Expression of Human Tyrosinase cDNA in Escherichia coli
저자
박소영 (중앙대학교 자연과학대학 화학과) ; 공광훈 (중앙대학교 자연과학대학 화학과) ; 박희중 (중앙대학교 자연과학대학 화학과)
발행기관
中央大學校 遺傳工學硏究所(Institute of Genetic Engineering Chung-Ang University)
학술지명
권호사항
발행연도
1997
작성언어
Korean
주제어
KDC
476.1
자료형태
학술저널
수록면
33-39(7쪽)
제공처
소장기관
Tyrosinase는 활성부위에 한 쌍의 구리이온을 함유하고 있는 metalloprotein으로 멜라닌 생합성에 중요한 역할을 한다. Human tyrosinase의 메카니즘을 연구하기 위해 human tyrosinase 유전자에 대한 대장균에서의 대량발현계를 구축하였다. Plasmid pRHOHT2 (Shibahara et al, 1988. Tohoku J. Exp. Med. 156. 403)로부터 human tyrosinase cDNA sequence는 polymerase chain reaction에 의해 증폭되었으며, 발현벡터 pGEX-KG와 pTrcHis에 subcloning 되었다. 이렇게 작성된 plasmid pKG-Tyrosinase와 pHis-Tyrosinase를 대장균주 MV1190에 형질전환시켜, 유도제 isopropyl- β-D-thiogalactopyranoside로 human tyrosinase를 대량발현시켰다. 발현된 tyrosinase는 GSH affinity column과 immobilized metal affinity column으로 정제하였고, 정제된 재조합 tyrosinase는 SDS-gel 전기영동상에서 각각 84,000과 66,000 정도를 나타내었다. 또한 정제된 재조합 tyrosinase는 dopa oxidation 활성을 나타내었다.
Tyrosinase is a bifunctional copper-containing metalloprotein and play a central role and of melanin biosynthesis. In the study, we constructed several E. coil-expression system of human tyrosinase using a cDNA encoding human tyrosinase for its mechanism study. Human tyrosinase cDNA sequence, plasmid pRHOHT2 (Shibahara et al. 1988, Tohoku J. Exp. Med. 156, 403), was amplified by the polymerase chain reaction and was subcloned with pGEX-KG and pTrcHis expression vector. These recombinant tyrosinases were produced by induction with isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside. Overexpressed human tyrosinases were purified by GSH affinity column and immobilized metal affinity column. The molecular weights of the purified recombinant tyrosinases determined by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis was about 84,000 (pKG-Tyrosinase) and 66,000 (pHis-Tyrosinase), respectively. These enzymes also showed dopa oxidation activity.
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