구연 3 : 변형된 Cold glycine-acid법을 이용한 비예기항체 검출

국문 초록 (Abstract)

Background: 온난자가항체는 환자 본인의 적혈구뿐만 아니라 검사에 사용되는 모든 혈구에 응집반응을 일으키기 때문에 용혈성 수혈부작용을 일으킬 수 있는 비예기항체가 존재해도 검출되지 않을 가능성이 높아 정확한 항체의 동정을 위해서는 온난자가항체의 제거가 선행되어야 한다. 현재까지는 ZZAP법을 활용한 온난자가항체 제거법이 가장 널리 사용되고 있으나 검출과정이 복잡하고 시간이 많이 걸리며, 비예기항체를 검출하는데 어려움이 많다는 단점이 있다. 이에 본원에서는 2014년부터 환자의 혈청 내에 온난자가항체와 비예기항체가 혼합되어 있는 양상을 보이는 검체를 대상으로 Cold giycine-acid법으로 환자 적혈구에 결합된 항체를 용출 후 온난자가항체를 흡착하는 방식으로 변형하여 검사하고 있으며 검사시간이 단축되고인체 유해성이 적다는 장점이 있어 소개하고자 한다. Methods: 항체선별검사(BioRad, ID-DiaCell I II, Switzland) 및 항체동정검사(BioRad,ID-Dia Panel, Switzland), 직접항글로블린검사(BioRad, ID-Diluent2, Switzland)는 미세원주응집법(BioRad, LISS Coombs card, Switzland)으로 실시하였으며, 모든 패널에서 양성의 응집을 보인 4명의 환자를 대상으로 하였다. 두 개의 시험관에 3회 세척한 환자 적혈구 1mL, 0.1M Glycine-HCL (PH 3.0) 2mL, saline 1mL을 넣고 Ice bath에서 3분간 반응시킨후, 2,500rpm에서 3분간 원침하여 항체를 용출하였다. 먼저 첫 번째 시험관 에 담아있는 환자적혈구 농축액에 환자 혈청 2mL을 첨가하고 37°C에서 30분간 항온 하여 온난자가항체를 흡착시킨 후, 2,500rpm에서 3분간 원침하여 상층액을 채취하였다. 다시 두 번째 시험관에 담아있는 환자 적혈구 농축액에 첫 번째 채취된 상층액을 넣은 후 흡착과정을 반복한 뒤 흡착된 혈청으로 비예기항체를 동정하였다. Results: 항체선별및 항체동정검사에서 모든 혈구와 양성을 보이고 직접항글로블린 검사에서도 양성을 보인 4명의 환자 모두에게서 온난자가항체가 제거되거나 약해지는 양상을 보였으며, 비예기항체는 Anti-C&e 2예, Anti-D and Anti-C 1예, Anti-E&c and Anti-Jka 1예로동정되었다. 특히 Anti-E&c and Anti-Jka 1예에서 혈청희석법과 병행한 결과, 동일하게 온난자가항체가 제거되는결과를 보여 주었다 Discussion: 온난자가항체와 비예기항체가 공존할 경우 온난항체를 제거하는방법으로 보편적으로 사용되고 있는 ZZAP법은 시간이 많이 걸리고 Kell, M, N, S, Duffy 항원을 파괴하는 단점이 있다. 최근 많이 시도되고 있는 혈청희석법은 검사과정이 간단하고 신속하지만, 단순히 혈청의 희석에만 의존하므로 높은 역가의 자가온난항체와 낮은 역가의 비예기항체가 공존할 경우 정확한 동정이 불가능하고, ZZAP법에 비해 임상적으로 유의한 비예기항체 검출율이 낮다는 보고가 있다. Cold glycine-acid법으로 항체를 용출하고 온난자가항체를 흡착 후 이를 통해 비예기항체를 동정하는 것에 지속적인 경험과 연구가 이루어진다면 ZZAP법과 혈청희 석법의 단점을 보안할 수 있는 검사법이 되리라 사료된다.